[发明专利]一种蚜虫或植物感染RhPV病毒的检测方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种蚜虫或植物感染RhPV病毒的检测方法。

背景技术

RhPV是一种昆虫病毒，特异地侵染蚜虫，能够控制蚜虫的种群数量。以往对RhPV病毒的检测，主要采用酶联检测(ELISA)或通过组织免疫化学定位(electronmicroscopical methods)的方法来分析。这些方法既耗时，同时灵敏度和准确性也偏低，特别是很难检测到RhPV在蚜虫寄主植物中的存在分布。

分子生物学技术已经越来越多的应用于包括病毒学在内的很多领域的研究。RT-PCR作为一种分子生物学技术手段被用于病毒学的研究中，但目前还没有应用于RhPV病毒检测的报道。目前对RhPV病毒的检测，主要采用酶联检测及免疫组化定位的方法，还没有相关的快速分子生物学检测方法。

发明内容

本发明的目的是提供一种蚜虫或植物感染RhPV病毒的检测方法。

本发明所提供的蚜虫或植物感染RhPV病毒的检测方法，是提取蚜虫或植物组织样品的总RNA，再以核苷酸序列为序列表中序列1及核苷酸序列为序列表中序列2的特异性引物对进行RT-PCR反应，若检测扩增得到核苷酸序列为自GENBANKAccession Number为AF022937的5′端第8316-8689位的核苷酸序列的片段，则蚜虫或植物感染了RhPV病毒。

所述检测是否扩增得到核苷酸序列为自GENBANK Accession Number为AF022937的5′端第8316-8689位的核苷酸序列的片段的方法为将扩增产物通过凝胶电泳检测是否获得374bp的产物，或者直接对扩增产物进行测序检测扩增产物是否具有自GENBANK Accession Number为AF022937的5′端第8316-8689位的核苷酸序列。

本发明所使用的特异性引物，位于RhPV全序列重的第二阅读框(ORF2)。其中RhPV全序列包括2个阅读框ORF1(580-6573)和ORF2(7377-9558)，ORF1和ORF2分别编码非结构蛋白和衣壳蛋白。与编码非结构蛋白的基因相比，编码衣壳蛋白的基因有较高的特异性和保守性，因此选择位于ORF2的核苷酸片断进行RhPV病毒的鉴定，更具有代表性。根据RhPV全序列(GENBANK Accession Number：AF022937)设计引物，扩增核苷酸序列为自GENBANK Accession Number为AF022937的5′端第8316-8689的核苷酸序列的片段：RhPV_F1：5-GCAAACTCAGTATCTTCAGC-3(序列表中序列1)；RhPV_R1：5-TTTGATTTATGGCGTGGTGG-3(序列表中序列2)作为引物。

本发明的方法利用RT-PCR方法，能够快速，高效，精准的检测到蚜虫及其寄主植物中RhPV的分布和存在。本发明的方法大大缩短检测所需时间，从收集样品到检测完毕仅需4-5小时。并且本发明的方法检测所需样品量大大减少，同时检测精准    度大大提高，甚至可以检测单头蚜虫的带毒情况；另外以前的方法很难检测到RhPV在蚜虫寄主植物中的存在情况，而采用本发明的方法，仅需采取0.5-1cm²叶片，  就可检测到蚜虫寄主植物携带病毒与否，且结果可信度高。

附图说明

图1为本发明方法检测蚜虫中RhPV病毒感染的结果

图2为本发明方法检测单头蚜虫中RhPV病毒感染的结果

图3为本发明方法检测植物中RhPV病毒感染的结果

具体实施方式

实施例1、本发明的蚜虫或植物感染RhPV病毒的检测方法检测蚜虫中RhPV病毒感染