[发明专利]一组抗菌肽及其制备方法和应用

说明书

本申请是申请号为200310108033.x、申请日为2003年10月17日、发明名称为一组抗菌肽及其制备方法和应用的原申请的分案申请。

技术领域

本发明涉及一组抗菌肽、其制备方法及在制备治疗细菌、真菌、病毒感染的药物中的应用。

背景技术

抗菌肽是生物体经诱导产生的一种具有生物活性的小分子多肽，一般由20-60个氨基酸组成，分子量在2000-7000D左右。随着医学免疫学和分子生物学的迅速发展，抗菌肽的研究越来越成为生物技术与生物医药领域中的热门课题。至今为止，在许多动物(尤其是昆虫)、植物、微生物和人体上已发现了超过200多种抗菌肽，这类短肽不仅对细菌、真菌有广谱的杀菌作用，而且对病毒、原虫及癌细胞也有攻击作用。临床试验也表明，在机体感染病菌或可能导致病菌感染的情况下，抗菌肽能快速杀灭已侵入的病菌，并且能阻止病菌的继续侵染。

随着对抗菌肽一级结构和高级结构研究的不断深入，已有许多研究者对这些抗菌肽的结构和功能进行研究，发现在模拟膜的疏水环境下，分子中的α-螺旋度与其杀菌活性密切相关。另外研究结果表明抗菌肽是通过破坏膜的完整性使得细菌细胞膜渗漏而杀死细菌(Nakajima Y.etal.，J.Biol.Chem，262：1665-1669；Zasloff M.Nature，2002，415：389-395)。因此有人试图通过增加分子中α-螺旋结构或提高多肽中含正电荷氨基酸的比例来寻找更强抗菌活性的多肽(Broth W.B.etal.，Antimicrobial AgentsChemotherapy，2001，45：1894-1895；HongS.Y.etal.，Peptides，2001，22：1669-1674)。

发明内容

本发明需要解决的技术问题之一是提供一组抗菌肽。

本发明需要解决的技术问题之二是提供一组抗菌肽的制备方法。

本发明需要解决的技术问题之三是公开所述抗菌肽的应用。

本发明提供的抗菌肽是在对天然抗菌肽的序列、结构分析的基础上设计合成的，它们的序列如下：

Lys Trp Lys Leu Phe Lys Lys Ile Gly Ile Gly Lys Leu Leu Lys Lys Leu Leu Lys Lys Leu Leu Arg

Lys Trp Lys Leu Phe Lys Lys Ile Gly Ile Gly Lys Leu Leu Lys Leu Leu Lys Leu Leu Arg

Lys Trp Lys Leu Phe Lys Lys Ile Pro Lys Val Arg Ala Lys Ala Lys Thr Arg

Lys Trp Lys Leu Phe Lys Lys Ile Pro Val Gly Arg Val His Arg Leu Leu Arg Lys

Lys Trp Lys Leu Phe Lys Lys Ile Pro Lys Gly Arg Gly Lys Gln Gly Gly Lys

Lys Trp Lys Leu Phe Lys Lys Ile Gly Ile Gly Lys Val Arg Ala Lys Ala Lys Thr Arg

Lys Trp Lys Leu Phe Lys Lys Ile Gly Ile Gly Arg Gly Lys Gln Gly Gly Lys Val Arg

Lys Trp Lys Leu Phe Lys Lys Ile Pro Gly Arg Gly Lys Gln Gly Gly Lys Val Arg

本发明提供的一组抗菌肽，其制备方法可以是固相化学法，也可以将抗菌肽的编码基因克隆到载体上，然后在宿主细胞中表达后获得。其中表达载体可以是质粒或病毒中的一种，宿主细胞可以是原核细胞，包括大肠杆菌、枯草芽孢杆菌等，宿主细胞也可以是真核细胞、包括酵母细胞、植物细胞、昆虫细胞和哺乳动物细胞等。制备的抗菌肽可通过质谱鉴定。

为了深入研究本发明这类生物学活性抗菌肽的结构与功能关系，利用美国应用系统生物公司生产的Pioneer多肽合成仪制备一组多肽，以进行研究。下面以制备的具有下列氨基酸序列的GKIII-1和GKIII-2抗菌肽作为举例来进行叙述：

GKIII-1：

Lys Trp Lys Leu Phe Lys Lys Ile Gly Ile Gly Lys Leu Leu Lys Lys Leu Leu Lys

Lys Leu Leu Arg