[发明专利]重组人血管内皮抑制素缓释注射组合物

说明书

技术领域

本发明涉及医药技术领域，是重组人血管内皮抑制素(rhEndostatin)的缓释注射组合物。

背景技术

20世纪60年代，美国哈佛医学院的Folkman博士提出“肿瘤生长依赖血管生长”这一 假设，即血管生成在实体瘤生长和转移过程中起着重要的作用，并于1971年提出“饿死肿瘤 疗法”理论。为了刺激血管的生成，肿瘤细胞会上调一系列血管生成因子，如：有酸性和碱性 成纤维细胞生长因子(aFGF，bFGF)和血管内皮生长因子(VEGF)等。同时也会产生一些 血管生成抑制因子。组织中血管生成表型的开放与关闭将取决于组织局部区域血管生成刺激 因子和抑制因子之间的动态平衡(Folkman，J.Nat.MED.1：27-31，1995；Hanahan，D.，et al.Cell. 86：353-364，1996)。研究发现内源性的血管生成抑制因子，如：血管紧张素(Angiostatin)，血 管内皮抑制素(Endostatin)等，均能够抑制小鼠体内肿瘤的生长(O’Relly，M.S.，et al.Cell. 79：315-328，1994；O’Relly，M.S.，et al.Cell.88：277-285，1997)。

血管内皮抑制素(Endostatin)是O’Reilly于1997年从小鼠内皮细胞系EOMAD的培养 液中分离得到的一种具有抑制血管内皮细胞作用的物质(O’Relly，M.S.，et al.Cell.88：277-285， 1997)。氨基酸序列分析该物质为胶原蛋白XVIII的羧基末端的降解片段，分子量为20kD左右。 血管内皮抑制素能够显著地抑制小鼠多种原发性肿瘤的生长。重复使用可使小鼠肿瘤处于持 久的休眠状态，并且不会产生耐药性(Boehm，T.et al.Nature.390：404-407，1997)。

重组人血管内皮抑制素(rhEndostatin)与重组鼠血管内皮抑制素在氨基酸序列上有85％ 的同源性。1996年美国Entremed公司采用酵母作为表达体系生产了重组人血管内皮抑制素。 Folkman报道采用连续皮下给药方式能够使rhEndostatin对小鼠Lewis肺癌的抑制率达到99％。 Entremed公司于1998年10月进行了I期临床试验，研究表明，即使剂量高达600mg/m²也未发现 剂量限制毒性。

以重组DNA技术生产，以大肠杆菌为表达系统，表达出的重组人血管内皮抑制素与先 前的Endostatin相比较，表达水平更高，疗效更强，并且没有因为附加N端序列而导致体内 免疫原性。它通过阻断肿瘤新生血管生成，从而阻断肿瘤的营养供给，逐步减小肿瘤体积， 达到抗肿瘤作用。目前已经获得国家药品食品监督管理局的批准，进行市场销售。本说明书 中使用的术语“内皮抑制素”是指还原和非还原凝胶电泳测得的分子量为18-22KDa，能够合 抑制内皮细胞增殖的蛋白质、片段或其修饰形式。

利用传统的大肠杆菌表达方法得到的重组人血管内皮抑制素难以复性并且易于形成沉 淀，而用巴斯德毕赤酵母表达系统所耗费的生产成本巨大，两种方法均未能解决将重组人血 管内皮抑制素进行工业生产的问题。为此罗永章等人通过修饰人血管内皮抑制素的核苷酸编 码序列，生产出N末端带有附加氨基酸序列的重组人血管内皮抑制素(rhEndostatin，商品名 Endostar，中文商品名：恩度)，大大简化了纯化步骤，提高了产物的纯度(ZL00107569.1)。 所生产的重组人血管内皮抑制素由192个氨基酸构成，其氨基酸序列为： MGGSHHHHHHSHRDFQPVLHLVALNSPLSGGMRGIRGADFQCFQQARAVGLAGTFRAFL SSRLQDLYSIVRRADRAAVPIVNLKDELLFPSWEALFSGSEGPLKPGARIFSFDGKDVLRHPT WPQKSVWHGSDPNGRRLTESYCETWRTEAPSATGQASSLLGGRLLGQSAASCHHAYIVLCI ENSFMTASK