[发明专利]从哺乳动物凝固血中提取基因组DNA的方法

权利要求书

1.一种从哺乳动物凝固血中提取基因组DNA的方法，包括以下步骤：

1)将剪碎的哺乳动物凝固血用双蒸水清洗去除血红素，再将其与裂解液按体积比为3-5∶5混合，向混合液中加入蛋白酶K至终浓度为360-400mg/mL混合液，然后将混合液在55-65℃下水浴3-6小时至溶液中不再有粘稠的团块；所述裂解液由NaCl、Na₂-EDTA和SDS组成，它们的浓度依次为140-160mM、40-60mM和1-2克/100毫升裂解液；

2)将步骤1)获得的混合液与5.5-6.5M NaCl溶液和氯仿按体积比为1∶0.5-0.9∶1.5-1.9混合后，振荡，再离心，留上清；

3)将上清液与体积/体积百分浓度为90-100％的冰乙醇按体积比1∶0.8-1.2混匀，得到的白色沉淀为基因组DNA。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述剪碎的凝固血与裂解液的体积比为4∶5；加入蛋白酶K的终浓度为380mg/mL混合液。

3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：步骤1)中所述裂解液中NaCl、Na₂-EDTA和SDS的浓度依次为150mM、50mM和2克/100毫升裂解液。

4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：步骤1)中所述的水浴温度为55℃，水浴时间为3小时；水浴期间要进行振荡。

5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：步骤2)中所述NaCl溶液的浓度为6M，混合液、NaCl溶液和氯仿的体积比为1∶0.7∶1.7；振荡时间为10-30s；离心条件为在10000-14000rpm下离心5-15min。

6.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：步骤3)中所述冰乙醇的体积/体积百分浓度为90％；上清液与冰乙醇的体积比为1∶1。

7.根据权利要求1-6任一项所述的方法，其特征在于：步骤3)中所述得到的基因组DNA还要用体积/体积百分浓度为70％的冷乙醇进行洗涤。

8.根据权利要求1-6任一项所述的方法，其特征在于：所述凝固血来源于牛、猪或羊。