[发明专利]一种在医疗器械表面固定抗体的方法

权利要求书

1.一种在医疗器械表面固定抗体的方法，主要包括①器械本体表面的预处理、②制备孔洞、③器械本体表面的后处理、④固定抗体工艺步骤，其特征在于所述的②制备孔洞是采用化学腐蚀、电化学腐蚀、阳极氧化、微弧氧化或微弧氮化方法在器械本体表面制备大小均一的400～600nm的孔洞；所述的③器械本体表面的后处理是将上述处理好的器械本体材料先使用浓度为99.5％的丙酮分析纯溶液，再经蒸馏水利用频率为28～100khz超声波清洗本体材料5～15min；最后将清洗后的本体材料放置在干燥机中，温度设定在30～40℃，干燥30～60min后取出备用；或用蒸馏水配制浓度为1～38％的盐酸溶液，将本体材料浸泡在配好的溶液中，放置在恒温箱中，温度设定在20℃左右，放置30min～48h取出；所述的④固定抗体是将表面带有孔洞的器械本体浸没在含有生物制品抗体的溶液中，调节抗体缓冲液的pH值使抗体溶液带正电荷，通过正负电荷相吸将生物制品抗体固定在器械本体表面。

2.根据权利要求1所述的一种在医疗器械表面固定抗体的方法，其特征在于所述的①器械本体表面的预处理：利用超声波对器械本体表面清洗清除杂质，使用浓度为99.5％的丙酮分析纯溶液，或浓度为75％的医用乙醇溶剂，利用频率为28～100khz超声波清洗支架本体材料，清洗5～15min，去除本体表面的杂质，将清洗后的本体材料放置在干燥机中，温度设定在30～40℃，干燥30～60min后取出备用。

3.根据权利要求1所述的一种在医疗器械表面固定抗体的方法，其特征在于②制备孔洞：所述化学腐蚀或电化学腐蚀方法是将器械本体材料浸泡在0～100℃温度的腐蚀液中，腐蚀时间根据浓度、温度不同控制在1min～480h后形成单尺寸纳米级400-600nm的孔洞。

4.根据权利要求3所述的一种在医疗器械表面固定抗体的方法，其特征在于，所述腐蚀液为浓度为1～38％的盐酸，或含有1～38％的盐酸混合1～98％的硫酸成分的盐酸混酸溶液，

5.根据权利要求1所述的一种在医疗器械表面固定抗体的方法，其特征在于所述的器械本体包括外科植入材料或植入硬组织的支架。 

6.根据权利要求5所述的一种在医疗器械表面固定抗体的方法，其特征在于所述支架为球囊扩张型支架、自膨胀型支架、血管支架或非血管支架，基材为不锈钢、镍钛记忆合金、钴基合金、纯钛或钛合金的支架。

7.根据权利要求1所述的一种在医疗器械表面固定抗体的方法，其特征在于所述的生物制品抗体包括下述一种或多种物质：肝素、抗血小板膜糖蛋白受体剂拮抗、抗体治癌药物、阿昔单抗、生物多肽、CD34抗体、CD31抗体或CD133抗体。

8.根据权利要求1所述的一种在医疗器械表面固定抗体的方法，其特征在于所述的④固定抗体：

(1).将表面带有孔洞的支架浸没在含有0.1～10μg/ml CD34抗体磷酸盐缓冲液溶液中，25～37℃温育20～30min后取出；

(2).将支架用磷酸盐缓冲液溶液清洗3次，每次5min，保持室温向支架吹风15min，待支架干燥后4℃保存；

(3).将表面带有抗体的支架浸没在500μl 5％牛血清白蛋白的磷酸盐缓冲液溶液中，25～37℃温育20～30min后取出支架，空气中晾干；

(4).将支架放入500μl 0.01ng/μl人重组CD34抗原的磷酸盐缓冲液溶液中，25～37℃温育20～30min后取出支架，空气中晾干；

(5).将支架放入500μl 1μg/ml的异硫氰酸荧光素标记的CD34抗体的磷酸盐缓冲液溶液，或辣根过氧化物酶标记的山羊抗小鼠的IgG的磷酸盐缓冲液溶液，25～37℃温育20～30min后取出支架；

(6).将支架用磷酸盐缓冲液溶液清洗3次，每次5min后晾干支架。

9.根据权利要求1所述的一种在医疗器械表面固定抗体的方法，其特征在于④固定抗体之后进行⑤抗体活性检测：采用人工模拟血液流动学和支架表面抗体活性检测方法验证固定生物制品抗体的有效性，通过荧光显微镜对支架进行荧光照相，或采用3-氨基-9-乙基-咔唑染色试剂盒，免疫组化染色后拍照。