[发明专利]制备冻干基因工程菌感受态细胞的生产工艺及保护剂配方

权利要求书

1. 一种冻干的感受态粉剂，其特征在于将冷冻干燥技术与基因工程菌感受态细胞的制备工艺相结合，得到一种冻干的感受态粉剂的基因工程菌感受态细胞制备方法。

2. 权利要求1的制剂，是冻干粉剂，其中所述该制品生产过程无菌操作、低温、真空、干燥，所得制剂能以固体形式，在介于-20℃～4℃宽温度范围内稳定保存一段时期仍维持高转化效率，便于贮存和运输。

3. 权利要求1的制剂，其特征在于由液体溶液制成可贮藏的粉针剂时使其在-20℃条件下保藏一年转化活性损失低于30％。

4. 权利要求1的制剂，由药学上可以接受的冻干保护剂组成，其特征在于：其中的冻干保护剂由选自明胶、脱脂牛奶、右旋糖苷、海藻糖、蔗糖、山梨醇或甘露醇其中之一或任意组合的物质和水制成。

明胶：          0.001％～2％或脱脂牛奶：0.5％～50％

右旋糖苷：      0.1％～20％

海藻糖或蔗糖：  0.1％～20％

山梨醇或甘露醇：0.1％～20％

其余为水

5. 权利要求1的制剂，其中的冻干保护剂由选自明胶、脱脂牛奶、右旋糖苷、海藻糖、蔗糖、山梨醇或甘露醇其中之一或任意组合的物质和水制成。

明胶：          0.01％～1％或脱脂牛奶：10％～20％

右旋糖苷：      3％～10％

海藻糖或蔗糖：  3％～8％

山梨醇或甘露醇：3％～8％

其余为水

6. 权利要求1的制剂，其中的冻干保护剂各组分之间的重量配比如下：

明胶：        0.1％

右旋糖苷：    8％

海藻糖：      5％

山梨醇：      5％

其余为水

7. 权利要求1的制剂，其中的冻干保护剂各组分之间的重量配比如下：

明胶：        0.05％

右旋糖苷：    6％

海藻糖：5％

甘露醇：5％

其余为水

8. 权利要求4的保护剂的制备方法，其特征在于，经过以下步骤：

a 称取适量明胶1g，室温放置5分钟，40℃水浴条件下搅拌，使其分散均匀，90℃下用活性炭吸附处理30分钟。

b 称取右旋糖苷、海藻糖、蔗糖、山梨醇或甘露醇或它们的任意组合各适量，加热溶化后加入0.8％的活性炭90℃下吸附处理30分钟。

c 用0.45μM微孔滤膜过滤上述混合溶液，混合均匀后用注射用水定容，115℃高压灭菌20分钟。冷却后无菌条件下分装备用。

9. 权利要求1的制剂的生产工艺，细胞的群体生长通过控制种子培养状态和放大培养的温度、通气量和培养时间来控制。摇瓶的转数控制在200～300rpm；细胞的培养时间可通过监控溶氧来完成，细胞经过转种放大培养一段时间通过检测紫外可见分析仪检测OD550在0.5～0.8之间；感受态细胞的培养温度范围为20℃～30℃。

10. 权利要求1的制剂的生产工艺，摇瓶的转数控制在275rpm；细胞经过转种放大培养一段时间通过检测紫外可见分析仪检测OD550在0.65～0.75之间；感受态细胞的培养温度为23℃。