[发明专利]具有抗肿瘤活性的抗双链DNA单克隆抗体及其制备方法

说明书

技术领域：

本发明涉及生物工程领域以及肿瘤免疫治疗领域，涉及一种单克隆抗体，特别是一种具有抗肿瘤活性的抗双链DNA单克隆抗体及其制备方法。

背景技术：

肿瘤生物免疫治疗是继手术治疗、放射治疗和化学药物治疗之后新型的肿瘤治疗手段，其中，针对肿瘤抗原物质而研制的单克隆抗体(monoclonal antibody，mAb)是目前肿瘤生物治疗的热点之一。抗原抗体反应的特异性决定了针对肿瘤特异性靶抗原的单克隆抗体会优先与相应的肿瘤组织结合，而不识别正常的组织。单克隆抗体不仅直接诱导肿瘤细胞调亡，并可偶联放疗化疗药物从而降低药物对正常组织的非特异损伤，减少治疗的副作用。单克隆抗体正是以其特异性、抑制肿瘤特性成为肿瘤靶向治疗的重要手段。

抗双链DNA(dsDNA)抗体是诊断系统性红斑狼疮(SLE)的主要标志。自身免疫病患者特别是SLE病人由于针对自身细胞来源的dsDNA发生免疫应答持续产生大量抗dsDNA抗体，因此抗dsDNA抗体在系统性自身免疫病的发生发展和免疫病理中起重要作用。有研究发现，在一些肿瘤病人的血清中也存在一定滴度的抗dsDNA抗体，且其水平直接与肿瘤病人的预后相关，即血清中含有高滴度抗dsDNA抗体的病人，往往预后较好，提示这种自身抗体可能具有抗肿瘤作用。

发明内容：

本发明的目的在于提供一种具有抗肿瘤活性的抗双链DNA单克隆抗体及其制备方法，所述的这种具有抗肿瘤活性的抗双链DNA单克隆抗体及其制备方法要解决现有技术中的抗肿瘤药物治疗肿瘤效果不佳，副作用大的技术问题。

本发明提供了一种具有抗肿瘤活性的抗双链DNA单克隆抗体，所述的单克隆抗体特异性结合dsDNA、或者能表达dsDNA的肿瘤细胞，所述的双链DNA来自BALB/c小鼠全基因组DNA序列(于2006年10月在国际上正式公开发表，参见美国National Institute of Environmental HealthScience国家环境卫生科学研究所15种近交系小鼠全基因组测序perlegen计划之BALB/c小鼠全基因组序列下载http://mouse.perlegen.com/mouse/download.html#SNP。或者参见Pubmed NCBI/Genomes/Eukaryotagenome/Vertebrates/Mus musculus(laboratory mouse)genomeview/Chromosome1-22，X，Yhttp://www.ncbi.nlm.nih.gov/mapview/map_search.cgi？taxid＝10090)、或者BALB/c小鼠肿瘤细胞的全基因组dsDNA、或者BALB/c小鼠骨髓瘤细胞SP2/0的全基因组dsDNA。

进一步的，所述的dsDNA是经蛋白酶和S1核酸酶处理的，因此不含蛋白成分和单链DNA(ssDNA)。

进一步的，所述的抗双链DNA单克隆抗体的亚型是小鼠IgG1。

进一步的，所述的抗肿瘤活性的肿瘤细胞包括但不限于BALB/c小鼠来源的Wehi164肿瘤、SP2/0肿瘤细胞、B16、p815、NS1、4T1肿瘤细胞以及C57BL/6小鼠来源的3LL、EL4细胞。

本发明还提供了一种具有抗肿瘤活性的抗双链DNA单克隆抗体的制备方法，包括一个通过小鼠dsDNA免疫BALB/c小鼠的步骤，包括一个获得分泌高效价抗dsDNA抗体的脾细胞的步骤，包括一个将分泌高效价抗dsDNA抗体的脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞融合的步骤，包括一个反复筛选得到分泌该单克隆抗体的杂交瘤细胞系的步骤，通过杂交瘤细胞系分泌得到抗双链DNA单克隆抗体。

进一步的，所述的具有抗肿瘤活性的抗双链DNA单克隆抗体的制备方法，包括以下步骤：

(1)提取BALB/c小鼠骨髓瘤细胞SP2/0的全基因组dsDNA；

(2)以福氏完全或不完全佐剂与dsDNA充分混匀呈乳浊液；

(3)以皮下注射方式免疫BALB/c小鼠；

(4)免疫后以ELISA方法证实小鼠血清中诱导了高效价的抗dsDNA抗体后，分离得到小鼠脾细胞，小鼠脾细胞与B淋巴细胞瘤融合，筛选永生化的分泌抗dsDNA单克隆抗体的融合杂交瘤细胞株；

(5)通过杂交瘤细胞株分泌获得抗dsDNA单克隆抗体。