[发明专利]具有抗肿瘤活性的抗双链DNA单克隆抗体及其制备方法

权利要求书

1.一种具有抗肿瘤活性的抗双链DNA单克隆抗体，其特征在于：所述的单克隆抗体特异性结合双链DNA、或者能表达双链DNA的肿瘤细胞，所述的双链DNA是来自BALB/c小鼠全基因组DNA序列、或者来自BALB/c小鼠肿瘤细胞的全基因组DNA序列、或者BALB/c小鼠骨髓瘤细胞SP2/0的全基因组DNA序列。

2.如权利要求1所述的具有抗肿瘤活性的抗双链DNA单克隆抗体，其特征在于：所述的双链DNA经蛋白酶和S1核酸酶处理。

3.如权利要求1所述的具有抗肿瘤活性的抗双链DNA单克隆抗体，其特征在于：所述的抗双链DNA单克隆抗体的亚型是小鼠IgG1。

4.如权利要求1所述的具有抗肿瘤活性的抗双链DNA单克隆抗体，其特征在于：所述的肿瘤细胞为BALB/c小鼠来源的Wehi164、或者SP2/0、或者B16、或者p815、或者NS1、或者4T1肿瘤细胞以及C57BL/6小鼠来源的3LL、或者EL4细胞。

5.一种制备如权利要求1所述的具有抗肿瘤活性的抗双链DNA单克隆抗体的方法，其特征在于：所述的方法包括一个通过小鼠双链DNA免疫BALB/c小鼠的步骤、一个获得分泌高效价抗双链DNA抗体的脾细胞的步骤、一个将分泌高效价抗双链DNA抗体的脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞融合的步骤和一个反复筛选得到分泌该单克隆抗体的杂交瘤细胞系的步骤，通过杂交瘤细胞系分泌得到抗双链DNA单克隆抗体。

6.如权利要求5所述的具有抗肿瘤活性的抗双链DNA单克隆抗体的制备方法，其特征在于：所述的方法包括以下步骤：

(1)提取BALB/c小鼠骨髓瘤细胞SP2/0的全基因组双链DNA；

(2)以福氏完全或不完全佐剂与双链DNA充分混匀呈乳浊液；

(3)以皮下注射方式免疫BALB/c小鼠；

(4)免疫后以ELISA方法证实小鼠血清中诱导了高效价的抗双链DNA抗体后，分离得到小鼠脾细胞，小鼠脾细胞与B淋巴细胞瘤融合，筛选永生化的分泌抗双链DNA单克隆抗体的融合杂交瘤细胞株；

(5)通过杂交瘤细胞株分泌获得抗双链DNA单克隆抗体。

7.如权利要求6所述的具有抗肿瘤活性的抗双链DNA单克隆抗体的制备方法，其特征在于：通过皮下注射免疫时，共免疫四次，第一次混合福氏完全佐剂，第二次混合福氏不完全佐剂；第三次和第四次直接注射双链DNA。

8.一种杂交瘤细胞株，其特征在于：采用如下步骤制备，包括一个通过小鼠双链DNA免疫BALB/c小鼠的步骤，包括一个获得分泌高效价抗双链DNA抗体的脾细胞的步骤，包括一个将分泌高效价抗双链DNA抗体的脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞融合的步骤，包括一个反复筛选得到分泌该单克隆抗体的杂交瘤细胞系的步骤。

9.如权利要求8所述的杂交瘤细胞株的制备方法，其特征在于：所述的方法包括以下步骤：

(1)提取BALB/c小鼠骨髓瘤细胞SP2/0的全基因组双链DNA，

(2)以福氏完全或不完全佐剂与双链DNA充分混匀成乳浊液，

(3)以皮下注射方式免疫BALB/c小鼠，

(4)免疫后以ELISA方法证实小鼠血清中诱导了高效价的抗双链DNA抗体后，分离得到小鼠脾细胞，小鼠脾细胞与B淋巴细胞瘤融合，筛选永生化的分泌抗双链DNA单克隆抗体的融合杂交瘤细胞株。

10.如权利要求9所述的杂交瘤细胞株的制备方法，其特征在于：通过皮下注射免疫时，共免疫四次，第一次混合福氏完全佐剂，第二次混合福氏不完全佐剂；第三次和第四次直接注射双链DNA。

11.一种具有抗肿瘤功能的药物组合物，其特征在于：含有权利要求1所述的具有抗肿瘤活性的抗双链DNA单克隆抗体、或者含有有效量的权利要求8所述的杂交瘤细胞株、或者含有有效量的权利要求8所述的杂交瘤细胞株和抗肿瘤药物的组合，以及药学上可接受的载体或赋形剂。

12.一种检测试剂，其特征在于：含有权利要求1所述的具有抗肿瘤活性的抗双链DNA单克隆抗体。