[发明专利]有抗肝癌细胞生长作用的土贝母粗提组分及其CDK1激酶抑制活性

说明书

技术领域

本发明涉及抗肿瘤药物筛选和中草药药效学评价领域。本发明更具体地涉及中草药土贝母(Bolbostemma Paniculatum(Maxin.)Franquet)提取物的有效成分及其用途。

背景技术

恶性肿瘤(通称癌症)，是当前威胁人类健康的主要疾病之一。据WTO统计，2002年全世界因恶性肿瘤死亡人数达710.6万。我国2000年癌症发病人数180-200万，死亡人数140-150万。外科疗法与放射疗法在恶性肿瘤治疗中具有重要作用，但由于肿瘤往往出现扩散与转移，对于恶性肿瘤迫切需要全身性的有效治疗方法。

细胞周期激酶家族(CDK)在细胞周期调控中具有极其重要的作用，多数恶性增生性疾病的发生、发展均与细胞周期调控功能紊乱有关。不受控制的细胞增殖是恶性肿瘤的最重要特征。所以，对CDK的激酶功能进行抑制是治疗增生性(即细胞过度增殖性的)疾病的新策略。

CDK1(又称cdc2)是CDK家族的主要成员，其功能有：(1)负责有丝分裂期的调控；(2)促进细胞跨越有丝分裂的检查点，完成有丝分裂等。因此，设计开发对CDK1具有高选择性的天然化合物将成为抗肿瘤药物的开发亮点。可参见例如，Charles Kung等，“利用差别途径敏感性的选择性激酶抑制”，SelectiveKinase Inhibition by Exploiting Differential Pathway Sensitivity，Chemistry &Biology 13，399-407，2006年4月；Yun Dai等，“细胞周期蛋白激酶抑制剂”，Cyclin-dependent kinase inhibitors，Current Opinion in Pharmacology，3：362-370，2003。

我国利用中草药抗肿瘤已有悠久的历史。中草药抗肿瘤与传统化疗药相比，具有毒副作用小等优点。从中草药活性成分中筛选针对CDK的抗肿瘤化合物将具有重要意义。

土贝母(Bolbostemma Paniculatum(Maxin.)Franquet)，属葫芦科植物，其性味苦，微寒。功能为散结、消肿、解毒。中医上用于治疗乳腺炎、颈腋淋巴结结核、慢性淋巴结炎、肥厚性鼻炎等。从土贝母中已经分离出的土贝母皂苷分别在中国专利CN94104124.7、CN95113751.4、CN99106201.9和CN200410021843.6中被证明具有广谱的抗癌效果。

具有抗肿瘤作用的土贝母活性组分是否同时具有CDK1的抑制活性，这将为从中草药中寻找新型抗肿瘤药物CDK1抑制剂提供有用线索。本领域迫切需要研究并分离出同时兼具抑制肿瘤细胞增殖和抑制CDK1激酶活性的天然药物活性成分，以更低毒、高效地治疗癌症。

发明内容

本发明的目的正是提供一种同时兼具抑制肿瘤细胞增殖和抑制CDK1激酶活性的天然药物活性成分。

在本发明的第一方面，提供了一种分离自土贝母提取物的土贝母有效成分，该有效成分具有以下特性：

(a)在如下的反相高压液相色谱层析条件下，所述土贝母有效成分在第30±5分钟时流出：

层析柱：C18预装的制备型层析柱，

流动相：75％甲醇水溶液，

流速：4ml/分钟

检测波长：280nm；

(b)所述的有效成分对肝癌细胞7721的生长有抑制作用；和

(c)所述的有效成分对CDK1激酶活性有抑制作用。

在本发明的一个实施方式中，所述土贝母提取物是土贝母的水溶性提取物。

在另一优选例中，所述的提取物是用选自甲醇、乙醇、丙酮、四氢呋喃、或N，N-二甲基甲酰胺有机溶剂或所述有机溶剂与水的混合溶剂进行提取所获得的提取物。

在本发明的一个优选例中，所述土贝母提取物是土贝母甲醇提取物。

在本发明的一个实施方式中，所述有效成分对肝癌细胞7721的生长抑制率≥70％，和/或对CDK1激酶活性的抑制率≥70％。

在另一优选例中，该抑制率用以下公式计算：

在本发明的一个实施方式中，所述有效成分对肝癌细胞7721的生长抑制率≥80％，和/或对CDK1激酶活性的抑制率≥80％。

在本发明的一个实施方式中，所述有效成分对肝癌细胞7721的生长抑制达到81.5％以上，且对CDK1激酶活性的抑制达88％以上。

在本发明的一个实施方式中，所述有效成分在第28±2分钟、或在32±2分钟流出。

在另一优选例中，所述有效成分在第28±1分钟、或在32±1分钟流出。