[发明专利]一种准确简便的蓑羽鹤性别鉴定方法

权利要求书

1、一种准确简便的蓑羽鹤性别鉴定方法，其特征在于先通过两对引物组合对蓑羽鹤基因组DNA的W、Z染色体上的特异序列进行扩增，再经1.5％琼脂糖凝胶电泳，用Gene Genius凝胶成像仪进行拍照记录，根据带型判断性别：雌性为两条带，雄性为一条带；

所述两对引物组合为：EE1(5’-ACAGTTTGTCTGTCTCCGGGGAA/AGCTGGAYTTCAGWSCATCTTCT-3’)、EE2(5’-TAGGCTGCAGAATACAGCAT/TTGTGCAGTTCTAGTCCATA-3’)和EE3(5’-CACCCTGGATTGGACAACCTATTTC/TCAGAGCACTCTTTCCAGGAA-3’)、EE4(5’-AAGCATAGAAACAATGTGGGAC/AACTCTGTCTGGAAGGACTT-3’)。

2、根据权利要求1所述准确简便的蓑羽鹤性别鉴定方法，其特征在于在对蓑羽鹤基因组DNA的W、Z染色体上的特异序列进行扩增时，采用10μL体系：取0.5 U Taq DNA聚合酶、1.5mM MgCl₂、200μM dNTP、4pmol引物和100ng蓑羽鹤基因组DNA，加双蒸水补至10μL。

3、根据权利要求1所述准确简便的蓑羽鹤性别鉴定方法，其特征在于蓑羽鹤基因组DNA的提取方法是：取抗凝血30μL于1.5mL离心管中，加入300μL裂解液，裂解24小时后，加入6μL蛋白酶K和2μL Rnase，55℃水浴10～15小时后，分别加等体积的饱和酚、苯酚-氯仿-异戊醇混合液和氯仿-异戊醇混合液各抽提一次，留上清，加冰无水乙醇沉淀DNA，70％酒精洗涤，干燥，TE溶解，4℃保存备用。