[发明专利]一种适用于饲料的转基因大豆检测试剂盒及检测方法

说明书

技术领域

本发明涉及转基因作物，具体的说是一种适用于饲料的转基因大豆检测方法及检测试剂盒。

背景技术

转基因作物是指利用重组DNA技术将外源基因整合于受体植物基因组、改变其遗传组成后产生的植物及其后代，也称为遗传修饰生物体(Genetically modified organisms，GMOs)。自1983年首例转基因植物问世以来，全球转基因作物的种植面积和销售收入均以倍数增长。但从严肃的科学意义上说，转基因农产品的生物安全性目前尚无确定的结论。人类关注转基因食品安全的同时，也关注着动物饲料的安全。饲料安全是食品安全的一个重要环节，转基因饲料的安全性检测也将为相应转基因食品的安全性提供有力的证据。我国的饲料生产已经具有相当规模，饲料中常用的原料有大豆、豆粕、棉籽粕、玉米菜籽粕等，这些可能含有转基因的作物有对动物、人体和生态环境存在不可知的危害。到目前为止，尚未见关于对饲料进行转基因检测的专利技术。

发明内容

本发明的目的在于提供一种具有高度灵敏性的适用于饲料的转基因大豆检测方法及检测试剂盒。

为实现上述目的，本发明采用的技术方案为：

试剂盒：

1)第一次PCR反应液体系：PCR反应缓冲液22.5μl、引物F2 0.5μl、引物R2 0.5μl，Taq DNA聚合酶0.5μl；

2)第二次PCR反应液体系：PCR反应缓冲液22.5μl、引物F30.5μl、引物R3 0.5μl、Taq DNA聚合酶0.5μl；

其中，第一次PCR反应引物为：

F2：5’-CATTTGGAGAGGACACGCTGACA-3’；R2：5’-CCGGAAAGGCCAGAGGATT-3’；

第二次PCR反应引物为：

F3：5’-TAACAACATGGCACAAGGGATACA-3’；R3：5’-CAGAGGATTTGCGGGCGGTTGC-3’；

第一次PCR和第二次PCR反应液体系中PCR反应缓冲液含有：10mMTris-HCI，pH8.3；50mM KCI、1.5mM MgCI2、dNTP 0.2mM；

3)阳性对照DNA 1μl。

所述阳性对照DNA为转基因大豆DNA。

检测方法：

1)提取模板DNA：

称取1-10g转基因大豆的原料，加入10-100ml预冷的提取缓冲液混匀；加入预热60-70℃的裂解缓冲液混匀；60-70℃温育30-60min；冷却后加入5-50ml氯仿、异戊醇和乙醇的混合液混匀，室温放置3-10分钟；而后在10000-13000rpm离心8-15min，取上清液并在上清液中加入5-50ml酚和氯仿混合液混匀，室温放置3-10分钟；再以10000-13000rpm离心8-15min取上清液；上清液中加入其体积2/3的预冷异丙醇，-20--40℃放置20-30min，10000-13000rpm离心10-15min，即得到提取模板DNA，待用；

2)进行转基因检测：

步骤1)得到的DNA模板液取1μl加入PCR反应缓冲液，并加入引物F2和R2各0.5μl以及TaqDNA聚合酶0.5μl，混合均匀，而后在94℃预变性2min，94℃变性30s，55℃退火30s，72℃延伸45s，共35个循环，最后72℃延伸10min；得到第一次PCR扩增产物，取1μl第一次PCR扩增产物加入无菌双蒸水进行50-100倍稀释，而后取1μl稀释液加入PCR反应液缓冲液中，并加入引物F3和3各0.5μl以及TaqDNA聚合酶0.5μl，混合均匀，以上述PCR反应条件进行第二轮扩增，得到扩增产物；

F2：5’-CATTTGGAGAGGACACGCTGACA-3’；R2：5’-CCGGAAAGGCCAGAGGATT-3’；

F3：5’-TAACAACATGGCACAAGGGATACA-3’；R3：5’-CAGAGGATTTGCGGGCGGTTGC-3’；

将扩增的产物进行琼脂糖凝胶电泳和紫外光检测结果，如果存在250bp的DNA条带，证明所检测的原料中含有转基因大豆。