[发明专利]用于微阵列的反应缓冲液

说明书

技术领域

【0001】本发明具体涉及用于微阵列的缓冲液。更具体地，本发明具体涉及 用于微阵列的核酸扩增和杂交的集成反应的缓冲液。

发明背景

【0002】核酸扩增技术提供了研究遗传材料的强有力工具。聚合酶链反应 (PCR)是频率使用较高的技术之一，其广泛用于克隆、基因表达分析、DNA 测序、基因图谱、药物开发、犯罪勘验等领域。

【0003】对于许多应用而言，除了扩增靶核酸序列以外，使用核酸杂交探针 来进一步鉴定序列也是有用的。探针的实例可以是与全部或部分靶序列互补的 标记的单链多核苷酸。探针杂交可以提供比简单PCR扩增更多的序列选择性， 并且允许独立鉴定靶核酸序列内的多个序列位点。

【0004】通常，PCR和探针杂交步骤作为独立的反应进行。最近，使用含核 酸扩增试剂和杂交试剂的单一试剂混合物，已将独立的反应集成为一个单一反 应。集成反应的众多优点之一包括，可减少试剂的添加步骤，并可降低试剂的 使用消耗。

【0005】同时分析多基因的方法，该需求一直在增加。微阵列是诸如科学、 临床和环境分析的理想平台，因为微阵列的微小体积可以允许以相对狭小的空 间和反应体积，排列成百上千的生物探针。微阵列是附着于固体表面的DNA显 微阵点的集合，其可形成阵列用于表达分析(可同时监测成百上千基因的表达 水平)。集成的核酸扩增反应和杂交反应，可用于微阵列领域以优化分析。

【0006】目前，用于集成反应的缓冲液具有较高的反应温度，其可导致膨胀 和反应容器的潜在渗漏。较高的反应温度也可导致气泡产生而干扰杂交信号的 识别。

附图简述

【0007】在并未必然按比例绘制的附图中，相同的数字记载了所有各视图的 基本相似组件。带有不同字母后缀的相同数字，表示不同实例的基本相似组件。 附图通常是以实例的方式而不是以限制的方式，来解释本申请所讨论的各具体 实施方式。

【0008】图1显示了某些具体实施方式的检测或定量核酸方法的方法框架流 程图100。

发明概述

【0009】本发明具体涉及用于核酸扩增和杂交集成反应的缓冲液组合物。缓 冲液包括约50-200mM的盐，约10-30mM的Tris-HCl，约2-10mM的水可溶性 镁盐，约0.05-1.5％的表面活性剂，约0.05-0.15mg/ml的稳定化蛋白，约50-300nM 的一种或多种引物，约20-150μM的一种或多种dNTPs，约5-15％的甘油，约 0.5-1.5％的甲酰胺，和至少约5单位/ml的聚合酶。本发明也具体涉及检测或定 量核酸的方法。

发明详述

【0010】下文详述包括参照附图的相关内容，该内容构成本发明详述的一部 分。附图通过图示来显示本发明用以实施的具体实施方式。这些具体实施方式 (在本文中也称为“实施例”)，被记载得足够详细以使本领域的技术人员能够 实施本发明。这些具体实施方式可以组合，可以利用，或者在不偏离本发明范 围的情况下，可以进行结构性和逻辑性改变。因此，下文详述不认为是对本发 明的限制，即，本发明的范围由所附权利要求书和其类似的文书予以限定。

【0011】在本文中，术语“a”或“an”用于是指包括一个或多于一个，术语 “or”用于表示非排除性的“或”，除非另有说明。此外，应当理解用在本文中 的措词和术语，如果没有相反的解释，其仅用于说明的目的而不是限制的目的。 此外，本文献所涉及的所有公开文献、专利和专利相关文献，都全文合并至本 文作为参考，尽管它们可单独合并作为参考。在本文与那些合并作为参考的文 献内容并不一致的情形下，合并参考文献的内容应当认为是本文献内容的内容 补充；对于相互矛盾的不一致情形，则应以本文内容为准。