[发明专利]用于生产脂肪酶的方法、能产生所述脂肪酶的转化解脂耶氏酵母细胞以及它们的应用

权利要求书

1.一种酵母耐酸的重组体脂肪酶制品，其通过包括下述步骤的方法得到：

a)培养解脂耶氏酵母细胞的步骤，所述细胞是名为YL-LIP2-6C的克隆，所述克隆于 2005年12月15日保藏在法国培养物和微生物国家保藏中心(C.N.C.M.)，保藏编号为 I-3542；以及

b)从培养液上清液中回收用所述细胞生产的所述重组体脂肪酶的步骤，

该方法的特征在于，

所述步骤a)包括：

a1)在由下述成分组成的培养基中预培养所述解脂耶氏酵母细胞：

其中所述培养基用下述添加剂富集：

添加剂          最终浓度

微量元素溶液    1ml/l

维生素溶液      1ml/l

其中微量元素溶液配方为：

维生素溶液配方为：

a2)发酵步骤，包括：

-在步骤a1)的培养基中的细胞生长期，以及

-在含有油酸作为唯一碳源的培养基中的脂肪酶生产期，

并且所述重组体脂肪酶制品在pH6时的催化活性为15,000至22750个单位每毫升培 养液上清液，其中一个单位对应于当使用的底物是三辛酸甘油酯时每分钟能催化释放1 μmol脂肪酸的酶的量，是在含有50mM的Na₂HPO₄、50mM的KH₂PO₄、150mM的NaCl、 pH6.0的缓冲液中、于37℃下测量的脂肪酶活性；并且/或者所述重组体脂肪酶制品中所 述脂肪酶的浓度大于1g脂肪酶/L。

2.如权利要求1所述的重组体脂肪酶制品，其特征在于，所述重组体脂肪酶制品在 pH6时包含的催化活性为20,000至22750个单位每毫升培养液上清液。

3.如权利要求1或2所述的重组体脂肪酶制品的应用，用于生产治疗与胰腺不足相关 的脂肪吸收不良综合症的药物。

4.一种用于治疗与脂肪吸收失调有关的疾病的药物，其特征在于，包含如权利要求1 或2所述的重组体脂肪酶制品。

5.如权利要求4所述的药物，其特征在于，所述疾病是与胰腺不足相关的脂肪吸收不 良综合症。