[发明专利]用于制备铁－琥珀酰酪蛋白的方法

说明书

本发明涉及一种用于制备铁-琥珀酰酪蛋白的新方法。

GB-A-2115821公开了含铁的琥珀酰化蛋白的制备。该制备包括碱 性条件下奶粉、乳蛋白、卵蛋白、牛血清蛋白、猪肝蛋白或大豆蛋白与 琥珀酸酐的反应，乳光溶液的离心或过滤，和酸化后的沉淀。沉淀物通 过在水中离心或过滤及再悬浮再来分离。随后分离出的沉淀物在弱碱条 件下再溶解，离心或过滤并再酸化该溶液以形成琥珀酰化蛋白的沉淀 物。为了与铁盐反应，沉淀物在弱碱性条件下再溶解。除了使琥珀酰化 蛋白纯化的繁琐的琥珀酰化蛋白的沉淀与再沉淀的纯化步骤外， GB-A-2115821所述的方法存在缺点，特别是因为形成以粘液形式存在 的、难于消除的不溶性衍生物(EP-A2-0939083)。为了克服GB-A-2115821 中的这些缺点，欧洲专利申请EP-A2-0 939 083描述了一种琥珀酰化酪 蛋白的铁络合物，其由食品级酪蛋白获得且其用于治疗与缺铁相关联的 病理状态。该铁-琥珀酰酪蛋白经由包括酪蛋白与琥珀酸酐反应生成琥珀 酰酪蛋白，其随后与氯化铁反应的复杂的合成来制备。在第一步琥珀酰 酪蛋白沉淀后，所获得的琥珀酰酪蛋白在剧烈的撕碎(dilaceration)下 再被溶解。撕碎是一种涉及高机械能量的方法，其特征在于使用了能够 消除仅通过机械搅拌不能消除的悬浮固体物质聚集体的泵。撕碎过程通 过使用专门的撕碎泵来完成，在该泵中推进器的运转与磨齿的运转相关 联。撕碎后所获得的琥珀酰酪蛋白的水溶液接着与氯化铁反应。同样所 获得的铁-琥珀酰酪蛋白在剧烈的撕碎下再溶解。因此，EP-A2-0 939 083 所述的方法由于这些分离和撕碎步骤使得该法复杂、耗时、耗资及耗能 而存在缺陷。此外，在该法中为了生产足够产量的目标产物需要使用数 量相对多的琥珀酸酐。GB-A-2115821的方法也是十分不利的，尤其是 对于工业化规模，因为与铁盐反应前其要求琥珀酰化蛋白的沉淀、再溶 解、再沉淀和再溶解步骤。

EP-A1-0319664也公开了一种以琥珀酰化多肽(其已经过酶降解) 来制备铁络合物的方法。关于那里用作起始原料的琥珀酰化多肽的制 备，转而参考文件IT 1150213，相应于前面提及的GB-A-2115821。

在本申请的优先权日之后公布的WO 2006/021843公开了一种用于 制备铁-琥珀酰酪蛋白的方法。与EP-A2-0 939 083和GB-A-2115821相 似，该文件也在实施例中描述了通过碱性溶液中酪蛋白与琥珀酸酐反应 来制备琥珀酰酪蛋白。随后琥珀酰酪蛋白通过添加盐酸来沉淀。沉淀出 的琥珀酰酪蛋白接着再全部被溶解并过滤，然后使其与氯化铁反应。也 就是说，WO 2006/021843的方法也公开了使琥珀酰酪蛋白中间体的溶 液(而不是悬浮液)与氯化铁反应之前，通过过滤、洗涤、湿法造粒、 溶解、过滤分离琥珀酰酪蛋白的附加步骤。此外，WO 2006/021843的 特征在于再溶解步骤前对沉淀出的琥珀酰酪蛋白中间体(intermediate) 的附加造粒步骤，其中，获得了有待于与氯化铁反应的琥珀酰酪蛋白溶 液。

因此，相关的现有技术显然已经认为琥珀酰酪蛋白中间体的附加再 溶解和再沉淀步骤在铁琥珀酰酪蛋白的制备中是必需的，并进一步认为 必需是琥珀酰酪蛋白中间体溶液而不是悬浮液与氯化铁反应。

在本申请的优先权日之后由澳大利亚专利局执行的专利检索中，下 列附加的现有技术文件已被确认，但其已被证明缺乏或没有重要性：AU 652021 B，EP 0739634 B1，EP 0243322 B1，US 6994876 B1，GB 1475577 A，US 2006/147552，WO 2006/001429和WO 2006/001430。

因而，本申请的一个目的是提供一种用于制备铁-琥珀酰酪蛋白的新 方法，其特征在于：

-一锅法反应(one pot reaction)，

-没有中间的分离、纯化和/或撕碎步骤，

-更短的操作时间，

-增加浓度导致更高的容积效率，

-更少量的琥珀酸酐，

-由于pH值攻击性更低(less aggressive)增加了原料阻力。