[发明专利]克隆的犬科动物及其生产方法

说明书

技术领域

本发明涉及克隆的犬科动物及其生产方法。更具体地说，本发明涉及生产克隆的犬科动物的方法和用该方法生产的克隆的犬科动物，所述生产克隆的犬科动物的方法包括将犬科动物的成熟的卵母细胞的细胞核去除掉以制备去核的受体卵母细胞，在优化的条件下采用犬科动物的体细胞作为核供体细胞将核移植到去核的卵母细胞中以制备核移植胚胎，然后将该核移植胚胎移植到代孕母体的输卵管中。

背景技术

随着最新的通过细胞融合或胞质内细胞注射进行体细胞移植技术的发展，已经可以制备克隆的动物了。

体细胞核移植技术是使将要出生的活体后代不经历在生殖过程中通常存在的减数分裂及形成单倍体生殖细胞的方法，该方法通过将成年动物的二倍体体细胞移植到去核的细胞中形成胚胎并在体内移植该胚胎形成新的个体。一般地，在体细胞核移植技术中，在体外人工培养到减速分裂的中期II以后，使用待移植的受体卵母细胞和体细胞供体细胞核。然后，为了防止因体细胞核移植导致的染色体变异，在移植体细胞前，必须除去成熟的卵母细胞的细胞核。在将体细胞注射到成熟的卵母细胞的卵周隙或细胞质中后，用电刺激使去核的卵细胞和体细胞相互融合。用电刺激或化学物质激活融合体，并将该融合体移植到代孕母体中以生产活体后代。

在本领域可以广泛地采用这种体细胞核移植技术，例如，优良动物的繁殖，稀有动物或濒危动物的保护、某种营养素的生产、治疗用的生物材料的生产、用于器官移植的动物的生产、具有某种疾病或症状的动物的生产、用作替代如细胞和基因的治疗在内的器官移植的具有药用价值的动物的生产。

动物克隆技术首先由英国Roslin Institute的Wilmut博士实现的，Wilmut博士通过取出六岁的绵羊的乳腺细胞并将该细胞移植到去核的卵母细胞中以制备核移植胚胎，然后在体内移植该胚胎，从而得到克隆动物多莉(Dolly)。自那以后，通过使用成年动物的体细胞进行核移植得到了克隆奶牛、克隆小鼠、克隆山羊、克隆猪和克隆兔(WO 9937143A2，EP 930009A1，WO9934669A1，WO 9901164A1和US 5,945,577)。

与此同时，不仅仅是工业动物如奶牛和猪，宠物如狗的克隆也引起了许多人的兴趣。最近，在宠物中，猫首先被克隆出来，并且克隆狗的研究也在进行。

然而，还没有报道表明通过体细胞移植技术已经成功地克隆了犬科动物。

发明内容

因此，本发明的发明人进行了克隆犬科动物的生产方法的研究，结果，本发明的发明人首先用体细胞移植方法在优化的电融合条件、核移植胚胎激活条件和胚胎移植到代孕母体的条件下生产了克隆的犬科动物，从而完成了本发明。

因此，本发明的一个目的是提供一种采用体细胞核移植技术生产犬科动物的核移植胚胎的方法。

本发明的另一个目的是提供一种采用所述方法制备的犬科动物的核移植胚胎。

本发明的另一个目的是提供一种生产克隆的犬科动物的方法，该方法包括将所述核移植胚胎移植到代孕母体中以生产活体后代的步骤。

本发明的另一个目的是提供一种采用所述方法生产的克隆的犬科动物。

为了实现上述目的，一方面，本发明提供了一种采用体细胞核移植技术制备犬科动物的核移植胚胎的方法。

另一方面，本发明提供一种采用所述方法制备的犬科动物的核移植胚胎。

另一方面，本发明提供一种生产克隆的犬科动物的方法，该方法包括将所述核移植胚胎移植到代孕母体中以生产活体后代的步骤。

另一方面，本发明提供一种采用所述方法生产的克隆犬科动物。

在下文中，将详细描述本发明。

术语定义

本文中使用的术语“核移植”是指通过人工地将一个去核的细胞和一个具有核DNA的细胞合并，以获得具有相同特征形式和性质的基因操作技术。

本文中使用的术语“核移植胚胎”是指注入或融合有核供体细胞的胚胎。

本文中使用的术语“克隆”是指制备具有与另一个体单位相同的基因组的新个体单位的基因操作技术。在本发明中，该术语尤其是指一个细胞、胚胎细胞、胎儿细胞、和/或动物细胞具有与另一个细胞、胚胎细胞、胎儿细胞、和/或动物细胞基本相似或相同的核DNA序列的事实。

本文中使用的术语“核供体细胞”是指被转移到受体卵母细胞的作为核受体的细胞或细胞核。

本文中使用的术语“受体卵母细胞”是指在去除核后接受核供体细胞的细胞核移植的卵母细胞。

本文中使用的术语“成熟卵母细胞”是指处于减速分裂中期II的卵母细胞。