[发明专利]克隆的犬科动物及其生产方法

权利要求书

1.一种制备犬科动物的核移植胚胎的方法，该方法包括以下步骤：

(a)将犬科动物的成熟的卵母细胞的细胞核去除掉，以制备去核的受体卵母细胞；

(b)从供体犬科动物的组织中分离体细胞，以制备核供体细胞；

(c)将步骤(b)制备的所述核供体细胞显微注射到步骤(a)制备的所述去核的卵母细胞中，并在3.0-3.5KV/cm的电压下对供体细胞和去核的卵母细胞进行电融合；和

(d)激活步骤(c)制备的融合的卵母细胞。

2.根据权利要求1所述的方法，其中，所述成熟的卵母细胞为在体内成熟的卵母细胞。

3.根据权利要求2所述的方法，所述在体内成熟的卵母细胞是在排卵后48-72小时从犬科动物收集得到的。

4.根据权利要求1所述的方法，其中，步骤(b)中的所述体细胞为选自由卵丘细胞、上皮细胞、成纤维细胞、神经细胞、表皮细胞、角化细胞、造血细胞、黑素细胞、软骨细胞、红细胞、巨噬细胞、单核细胞、肌肉细胞、B淋巴细胞、T淋巴细胞、胚胎干细胞、胚胎生殖细胞、胎儿细胞、胎盘细胞和胚胎细胞所组成的组中的一种细胞。

5.根据权利要求1所述的方法，其中，所述体细胞为成纤维细胞或卵丘细胞。

6.根据权利要求1所述的方法，其中，步骤(c)中的所述电融合在3.0-3.5KV/cm的直流电压下进行1-3次，每次10-30μs。

7.根据权利要求1所述的方法，其中，步骤(d)中的激活步骤是通过用钙离子载体和6-二甲基氨基嘌呤对融合的卵母细胞进行同时或逐步的处理而进行的。

8.根据权利要求7所述的方法，其中，所述激活方法是通过用5-10μM的钙离子载体将融合的卵母细胞在37-39℃下处理3-5分钟，然后用1.5-2.5mM的6-二甲基氨基嘌呤将融合的卵母细胞在37-39℃下处理4-5小时而进行的。

9.根据权利要求1所述的方法，其中，所述犬科动物选自由狗、狼、狐、豺、丛林狼、韩国狼和狸所组成的组中。

10.根据权利要求1所述的方法，其中，所述犬科动物选自由狗、狼和狐所组成的组中。

11.一种核移植胚胎，该核移植胚胎是由权利要求1-10中任意一项所述的方法制备的。

12.根据权利要求11所述的核移植胚胎，该核移植胚胎保藏于韩国典型培养物保藏中心，保藏编号为KCTC 10831 BP。

13.一种生产犬科动物的方法，该方法包括将权利要求11或12所述的核移植胚胎移植到代孕母体的输卵管中以生产活体后代的步骤。

14.根据权利要求13所述的方法，其中，所述犬科动物选自由狗、狼、狐、豺、丛林狼、韩国狼和狸所组成的组中。

15.根据权利要求13所述的方法，其中，所述犬科动物选自由狗、狐和狼所组成的组中。

16.一种克隆的犬科动物，该克隆的犬科动物是由权利要求13所述的方法生产的。

17.根据权利要求16所述的克隆的犬科动物，其中，所述克隆的犬科动物的基因型与权利要求1所述的核供体细胞或核供体动物相同。

18.根据权利要求16所述的克隆的犬科动物，其中，所述犬科动物选自由狗、狼、狐、豺、丛林狼、韩国狼和狸所组成的组中。