[发明专利]检测单个细胞中的核酸和鉴定异质大细胞群中罕见细胞的方法

权利要求书

1.一种组合物，其包含：

包含细胞的样品，所述细胞含有或可能含有一种或多种靶核酸；

对于每种靶核酸，包含选自下组之一的核酸：

(i)一或多个标记探针，其中各标记探针包含一或多个标记；

(ii)一或多个标记探针，其中各标记探针包含一或多个标记，以及 一或多个放大核酸，其中各放大核酸能够与一或多个标记探针杂交； 或

(iii)一或多个标记探针，其中各标记探针包含一或多个标记，一或 多个放大核酸，其中各放大核酸能够与一或多个标记探针杂交，以及 一或多个辅放大核酸，其中各辅放大核酸能够与一或多个放大核酸杂 交；

对于每种靶核酸，包含两个或多个不同的捕获探针，其中两个或多个 捕获探针中的每一个捕获探针包含与所述靶核酸上的一个区段互补的区段 T，与标记探针、放大核酸或辅放大核酸上的邻近区段互补的区段L，且其 中各所述区段T与所述靶核酸的非重叠区域互补，且各区段L与所述标记 探针、放大核酸或辅放大核酸上的区域互补；

其中，当所述包含细胞的样品内含有单个或多个拷贝的所述靶核酸， 所述两个或多个捕获探针能在该样品内在非靶核酸的存在下同时与单个靶 核酸协同杂交；

其中，所述标记探针的一个拷贝能同时与所述两个或多个捕获探针杂 交；所述放大核酸能同时与所述两个或多个捕获探针杂交并与一或多个所 述标记探针杂交；或所述辅放大核酸能同时与所述两个或多个捕获探针杂 交并与一或多个所述放大核酸杂交，所述放大核酸能与一或多个所述标记 探针杂交。

2.如权利要求1所述的组合物，其特征在于，所述两个或多个捕获探 针与所述辅放大核酸、放大核酸或标记探针的拷贝的杂交温度高于各单个 捕获探针与所述辅放大核酸、放大核酸、或标记探针形成的复合物的解链 温度T_m。

3.如权利要求1所述的组合物，其特征在于，所述两个或多个捕获探 针各自的区段L相对于区段T均位于5'端，或所述两个或多个捕获探针各 自的区段L相对于区段T均位于3'端。

4.如权利要求1所述的组合物，其特征在于，所述两个或多个不同的 捕获探针能够与所述靶核酸上独特而毗邻的区段杂交。

5.如权利要求1所述的组合物，其特征在于，所述组合物进一步包含 一种或多种封闭探针，所述封闭探针能够与所述靶核酸没有被捕获探针占 据的区域杂交。

6.如权利要求1所述的组合物，其特征在于，所述一种或多种靶核酸 独立地选自：DNA、染色体DNA、RNA、mRNA、microRNA、核糖体 RNA、细胞的内源核酸、通过用病原体感染细胞而导入细胞或在细胞中表 达的核酸。

7.如权利要求1所述的组合物，其特征在于，所述一种或多种靶核酸 包含含有mRNA的第一区域的第一靶核酸，以及含有该同一mRNA的第 二区域的第二靶核酸。

8.如权利要求1所述的组合物，其特征在于，所述一种或多种靶核酸 包含参比核酸，所述一种或多种靶核酸的信号可以相对于所述参比核酸的 信号进行标准化。

9.如权利要求1所述的组合物，其特征在于，所述包含细胞的样品源 自体液或血液。

10.如权利要求1所述的组合物，其特征在于，所述样品包括组织切 片。

11.如权利要求1所述的组合物，其特征在于，所述细胞在杂交、捕获 和/或检测步骤中以悬浮形式存在。

12.如权利要求1所述的组合物，其特征在于，所述细胞是循环性肿瘤 细胞。