[发明专利]一种检测蓖麻毒素的免疫层析试纸及其制备方法

权利要求书

1.一种检测蓖麻毒素的免疫层析试纸，包括吸水纸垫、紧密连接于所述吸水纸垫的包被有抗蓖麻毒素A链蛋白抗体的纤维膜、紧密连接于所述纤维膜上的含有抗蓖麻毒素B链蛋白抗体的免疫金胶体探针的金标垫和紧密连接于所述金标垫的样品垫。

2.根据权利要求1所述的检测蓖麻毒素的免疫层析试纸，其特征在于：所述吸水纸垫的下面还紧密连接有背板。

3.根据权利要求1所述的检测蓖麻毒素的免疫层析试纸，其中抗蓖麻毒素A链蛋白抗体按如下方法制备：选取一株抗蓖麻毒素A链蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞株免疫雌性Balb/C小鼠，一周后取腹水；将该抗体溶液喷到纤维膜上，室温晾干，然后将其粘贴在吸水纸垫上。

4.根据权利要求1所述的检测蓖麻毒素的免疫层析试纸，其中抗蓖麻毒素B链蛋白抗体按如下方法制备：肌肉注射重组蓖麻毒素B链蛋白0.2mg+等体积福氏完全佐剂，一周后1mg蛋白+等体积福氏不完全佐剂加强免疫，4周后加强免疫蛋白1mg，3天后抽血。

5.根据权利要求1所述的检测蓖麻毒素的免疫层析试纸，其中抗蓖麻毒素B链蛋白抗体的免疫金胶体探针按如下过程制备：

1)将0.01％HAuCl₄水溶液，加热煮沸，每100ml HAuCl₄溶液进行如下操作：

搅动下加入1.5ml的1％柠檬酸三钠水溶液，直到液体颜色稳定成葡萄酒红色，得到胶体金溶液；

2)确定最低偶联抗体浓度：调节胶体金溶液pH 9.0，将抗蓖麻毒素B链蛋白抗体稀释2mg/mL，并依次加入到1ml胶体金溶液中100μl、90μl、80μl、70μl、60μl、50μl、40μl、30μl、20μl、10μl、0μl，混匀后于室温下放置5min，加入10％NaCl水溶液0.1ml，混匀，静置，10-20min后观察液体颜色，胶体金溶液颜色不变时所含最少抗体量，为稳定1ml胶体金溶液所需最低偶联抗体量；

3)将终浓度为0.08mg/mL上述最低偶联抗体量的抗蓖麻毒素B链蛋白抗体加入到50ml胶体金溶液中，混匀后得到抗蓖麻毒素B链蛋白抗体的免疫胶体金探针溶液。

6.根据权利要求1或2所述的检测蓖麻毒素的免疫层析试纸，其特征在于：所述纤维膜为硝酸纤维膜、醋酸纤维膜；所述金标垫的材料为玻璃纤维膜、树脂；所述样品垫为玻璃纤维膜。

7.一种制备检测蓖麻毒素的免疫层析试纸的方法，包括以下步骤：

1)制备抗蓖麻毒素A链蛋白抗体，然后将上述抗体喷于纤维膜上，将该纤维膜粘贴在吸水纸垫上；

2)制备抗蓖麻毒素B链蛋白抗体；

3)制备含抗蓖麻毒素B链蛋白抗体的免疫胶体金探针；

4)将玻璃纤维膜或树脂浸泡到上述制备的免疫胶体金探针溶液，得到金标垫；干燥后粘贴在步骤1)得到的喷有抗蓖麻毒素A链蛋白抗体的纤维膜上；

5)在上述得到的金标垫上面再粘贴样品垫，得到检测蓖麻毒素的免疫层析试纸。

8.根据权利要求7所述的制备检测蓖麻毒素的免疫层析试纸的方法，其特征在于：所述吸水纸垫的下面还粘贴有背板。