[发明专利]一种干酪乳杆菌菌株及其制品在禽类免疫中的应用

说明书

技术领域

本发明涉及一种干酪乳杆菌(L.casei Zhang)，以及该菌株及其菌体成分在鸡新城疫疫苗和禽流感疫苗的协同免疫方面的应用。

技术背景

新城疫是由病毒引起的鸡和火鸡急性高度接触性传染病，也称亚洲鸡瘟或伪鸡瘟，常呈败血症症状。主要特征是呼吸困难，下痢、神经紊乱、黏膜和浆膜出血。本病1926年首次发现于印尼，同年发现于英国新城，据此命名为新城疫。本病分布于世界各地，1928年我国已有本病的记载。国际动物卫生组织和我国将本病列为A(一)类动物传染病之一。新城疫是危害我国养鸡业最严重的传染病。

新城疫疫苗有弱毒疫苗和灭活疫苗两大类，鸡新城疫弱毒疫苗有B1天然弱毒株，F天然弱毒株，LaSota天然弱毒株和适用于热带、亚热带地区的V4株。灭活疫苗主要有用白油和硬脂酸铝等化学试剂为佐剂的新城疫油乳剂灭活苗，蜂胶为免疫增强剂制备的新城疫蜂胶灭活疫苗，以氢氧化铝为佐剂的新城疫氢氧化铝灭活苗等。虽然疫苗种类多，但免疫后免疫失败或抗体水平低等导致新城疫的流行和非典型新城疫时有发生。

禽流感(Avian Influenza，AI)又称欧洲鸡瘟、真性鸡瘟，是由正粘病毒科、流感病毒属、A型流感病毒引起的禽类感染和/或疾病综合症。现在在全世界各种家禽和野生禽类中，已发现了上千种属于不同抗原亚型的流感病毒。更为甚者是在短短的几年时间里，先后发生禽流感H5N1、H7N7、H9N2病毒跨越种属屏障直接感染人类的病例，引起世界各地流感专家们的高度关注。虽然目前还没有发现禽流感H5N1、H7N7、H9N2病毒具有人传人的能力，但它们均属甲型流感病毒，而甲型流感病毒变异性非常大，就有可能通过抗原变异或通过与人流感病毒发生基因重配，形成重配株，从而具备人传人的能力。因此，禽流感给人类带来了严峻的挑战，它具有极其重要的公共卫生意义。

国内外的禽流感防制实践表明，疫苗免疫是防止禽流感暴发和造成巨大损失的主要措施、关键环节和最后防线。禽流感防治中应用的疫苗主要为灭活全病毒疫苗

灭活全病毒疫苗一般是用甲醛灭活，禽流感病毒鸡胚增殖的尿囊液，辅以佐剂制成的油乳剂疫苗。我国已经研制成功H5、H7亚型禽流感灭活疫苗，并取得了良好的免疫效果。目前禽流感的流行仍很严重，因此提高禽流感灭活疫苗的免疫效力是关键，而免疫效力与免疫佐剂关系密切。

目前疫苗接种结合抗生素化学药物的综合措施仍为养殖业疾病防控的主要手段，但由于部分疫苗免疫力不强，免疫保护期短等原因致使对某些病原性疾病的预防效果一直不甚理想，还出现了抗生素、激素和兴奋剂类等残留问题并对人类健康造成严重的威胁，针对这些问题科学家们将动物药品添加剂、免疫增强剂的研究方向投向了具有生长促进作用和增强免疫效果的微生态制剂以及中草药。

乳酸菌制剂在免疫协同作用方面国内外学者做了许多研究，如嗜酸乳杆菌对寄主的免疫系统有较强的调节作用。王会娟等人用乳酸菌培养后分别稀释为0.5％、0.1％和0.5％的剂量给雏鸡饮水，攻毒大肠杆菌后，在以后的成活率和日增重上，试验组与对照组相比均有不同程度的提高，尤其0.1％的处理效果最好。肽聚糖(peptidoglycan，PG)是革兰氏阳性菌细胞壁的主要组成成分。其具有多种免疫学活性，如可激活补体、调节免疫反应、刺激淋巴细胞增殖、激活吞噬细胞，从而抑制体内肿瘤细胞生长和增强机体抗感染的能力。细菌细胞壁(PG)是一种免疫增强剂，主要通过诱导各种免疫调空物质的释放来刺激免疫系统发挥其免疫功能。

近年来发现，多种细菌DNA对高等动物免疫系统具有强烈的免疫刺激作用，其免疫活性部位为非甲基化胞嘧啶鸟嘌呤二核甘酸的特定结构，即以CpG为核心，5’端紧接2个嘌呤，3’端紧接2个嘧啶，简写为5’-PuPuCpGpPyPy-3’。据报道，CpG-DNA可直接激活巨噬细胞分泌IL-12与TNF-α。人单核细胞受细菌DNA刺激后，IL-6、IL-12和TNF-Q等细胞因子分泌增加，MHC-I与MHC-II类抗原表达增加，共刺激信号CD86与CD40表达增加，抗原提呈功能增强。CpG-DNA还可延长抗原提呈细胞的存活期。细菌DNA可直接或间接地促进NK细胞的功能。CpG基序(CpG motif)刺激动物DC、单核巨噬细胞、NK细胞等多种免疫细胞的分化增殖，诱导细胞表面分子的表达及细胞因子的释放，协同调节机体的先天性防御反应与获得性免疫反应。

发明内容