[发明专利]一种用于去除致病抗体及其复合物的蛋白A免疫吸附材料及其合成方法和应用

说明书

技术领域：

本发明涉及用于血液净化治疗的蛋白A免疫吸附材料及其制备方法，它能够选择性地去除患者血浆中的致病抗体，尤其是免疫复合形式的致病抗体。

背景技术

免疫吸附是近十多年发展起来的一种新技术，用于治疗一些传统方法难以奏效的疾病。它将抗原、抗体或某些具有特定物理化学亲和力的物质作为配体与载体结合，制成吸附柱，利用其高特异性吸附性能，选择性或特异性地去除患者血液中致病因子，从而达到净化血液、缓解症状的目的。目前临床上应用免疫吸附能够通过特异性地去除自身抗体，治疗自身免疫性疾病和器官移植排斥反应，以及通过吸附低密度脂蛋白治疗高胆固醇血症及其并发症。这项技术与血浆置换相比，能迅速有效选择性去除多种自身抗体，具有治疗剂量大，不丢失血浆有用成分，不需置换血浆，可避免传播疾病的可能等优点，而且治疗效果显著。同时由于配体和抗体之间专一而可逆的结合，免疫吸附材料能反复洗脱重复使用，降低了治疗成本。2001年，在英国伦敦召开了欧洲第一届免疫吸附研讨会，来自17个国家的200多位专家学者参加了会议，重点讨论了免疫吸附在风湿病、肾脏病、神经系统疾病、血液病和心血管疾病中应用的经验，免疫吸附治疗已逐渐成为血液净化技术的一个重要分支，日益受到医学界的广泛关注。

最近二三十年来，研究合成出来的免疫吸附材料虽然不少，但主要都还是用于体外分离和纯化，应用于临床治疗疾病的并不多，实际疗效相对肯定且已被患者广泛接受的仅有蛋白A免疫吸附柱。这主要是因为用于血液净化的免疫吸附产品要求非常高，它必需符合如下要求才能进入人体治疗：(1)安全性：连接上去的配体牢固不易脱落进入血液，无毒性、无菌、无热源等；(2)有效性：因为人体内要被吸附去除的物质含量大，要通过吸附降到一定的水平才能达到治疗效果；(3)较高的选择性，即非特异吸附要小，以减少其治疗的副作用；(4)良好的生物相容性：即无毒、不溶解、不激活补体和凝血系统、不致敏等；(5)稳定性好，便于反复再生、储存和消毒；(6)成本不能太高：因为是应用于临床治疗，而且用量大，患者必须能承受该治疗的费用，因此成本要低，最好能重复使用以降低成本等。目前，临床上使用的商品化的蛋白A免疫吸附柱(瑞典Excorim公司)采用的载体是Sepharose CL-4B琼脂糖凝胶，与蛋白A通过溴化氰活化偶联。由于溴化氰是剧毒物质，合成过程对人体和环境危害较大；另外，用溴化氰方法偶联的蛋白A基团容易脱落进入人体，对病人产生较大的副作用，因而这一合成工艺不甚理想。夏列波等人发明了一种蛋白A-琼脂糖免疫吸附材料的新方法，他们采用环氧氯丙烷(申请号：01103114.X，公开号：CN1365853A)作为偶联试剂活化琼脂糖载体后与氨水反应。由于氨水分子较小，得到的免疫吸附材料间隔臂不够长，另外我们在实验中发现氨水反应活性低，偶联蛋白A少，合成得到的蛋白A免疫吸附材料对抗体的吸附效率低。

发明内容

本发明的目的在于提供一种从血浆中去除致病抗体及其复合物的蛋白A免疫吸附剂，它能够安全、高效和高选择性地去除患者血浆中的致病抗体，尤其是免疫复合形式的致病抗体。

本发明的另一目的是提供上述蛋白A免疫吸附剂的制备方法，该方法无毒、无害，制备得到的吸附剂对抗体的吸附效率高。

本发明的第三个目的是提供上述吸附材料在血液净化中的应用。

本发明的技术方案是：

一种用于去除致病抗体及其复合物的蛋白A免疫吸附材料，是琼脂糖凝胶与SPA偶联的高分子材料，具有如下化学结构：

其中：

代表琼脂糖凝胶

X代表n＝1～3，SPA代表葡萄球菌蛋白A。

琼脂糖凝胶是一种天然多糖，含有丰富的羟基，它可参与多种化学反应转化为活性基团，然后与蛋白A反应固定在琼脂糖凝胶载体上。本发明的基本构想是：选用环氧溴丙烷作为活化琼脂糖凝胶的试剂，较环氧氯丙烷而言，环氧溴丙烷具有更高的反应活性；经环氧溴丙烷活化后得到带环氧基团的琼脂糖凝胶，连接不同多胺类物质后与戊二醛进行反应，键合SPA，最后封端、还原双键。其合成的具体过程如下：

(1)、环氧溴丙烷活化琼脂糖凝胶，反应体系中琼脂糖凝胶占25％～40％的体积比(v/v)，环氧溴丙烷占9％～17％的体积比(v/v)，1～3M NaOH溶液占40％～60％的体积比(v/v)，且每毫升NaOH溶液中加入2毫克硼氢化钠，反应温度20～40℃，反应时间2～6小时；

(2)、用多胺类试剂对步骤(1)所得带有活性环氧基团的琼脂糖凝胶进行开环反应；反应温度40～70℃，反应时间2～6小时，多胺类试剂充分过量；