[发明专利]重组人角质细胞生长因子－2冻干粉针剂的生产方法

说明书

技术领域

本发明涉及制剂生产领域。更具体地，本发明提供了一种人角质细胞生长因子-2(KGF-2)冻干粉针剂，以及相应的生产方法，包括有关的辅料筛选和冻干工艺。

背景技术

1996年，Yamasaki等(Am J Physiol Gastrointest Liver Physiol 2000Nov；279(5))从鼠的胚胎中扩增到与角质细胞生长因子(Keratinocyte GrowthFactor，KGF)具有高度同源的一种崭新的细胞因子，称为角质细胞生长因子-2(KGF-2)，又叫做成纤维细胞生长因子-10(Fibroblast Growth Factor-10，FGF-10)。之后，Emoto等(J Burn Care Rehabil 2000 Jan-Feb；21(1Pt 1)：5-9)克隆到人的KGF-2cDNA，其编码的蛋白由208个氨基酸组成，N端有39个氨基酸的疏水信号肽，成熟蛋白169个氨基酸(40-208aa)，理论分子量为19.3kDa，对肝素具有较强的亲和作用。

KGF-2能特异性的结合于靶细胞表面的酪氨酸激酶受体FGFR2IIIb(KGFR)、FGFR1而触发信号传导，从而发挥生理作用。体外活性研究表明，在0.1-5nM(2-100ng/mL)浓度时对角质上皮细胞Bal/MK具有显著的促分裂作用，对成纤维细胞NIH3T3无作用，而在高于5nM的浓度时对NIH3T3同样具有显著的促进分裂和生长作用。研究表明，KGF-2mRNA的表达主要是在胚胎的发育过程之中，以及在特定的成年组织如肺、前列腺。在胚胎发育过程中KGF-2是起始肢芽的形成及促进其生长的关键的细胞因子。在创口愈合的过程中KGF-2mRNA高水平表达，动物试验结果表明，KGF-2在创口愈合中起着重要作用。

Han等(J Pathol 1999 Aug；188(4)：431-8)利用消炎痛诱导小鼠小肠溃疡模型研究表明，KGF-2静脉注射显著降低急性和慢性肠损伤。其通过刺激上皮恢复和保护性的前列腺素产生来抑制小肠炎症；烧伤等需要大面积皮肤移植的病人，面临严重的代谢问题和感染致死的危险，Smith等(Pharmacol Exp Ther 1999Jul；290(1)：464-71)用无胸腺裸鼠的皮肤移植试验模型，考查KGF-2对皮肤上皮形成动力学的影响，表明KGF-2对移植皮肤的愈合具有极为显著促进作用；Xia等(J Surg Res 1999 Feb；81(2)：238-42)利用局部缺血损伤的兔耳真皮溃疡模型，考查KGF-2对创口愈合以及对疤痕形成的影响，结果表明KGF-2显著促进表皮细胞生长，提升上皮形成，此外增强肉芽组织的形成(KGF无此作用)，较之KGF-1、TGF-beta等细胞因子，KGF-2最为有效且几乎不引起明显的疤痕；Miceli等利用硫酸葡聚糖钠盐诱导的鼠溃疡模型，发现KGF-2几乎完全恢复肠道表面的正常的细胞构造，表明了其对炎性肠病的临床治疗意义。Jimenez等通过小鼠背部皮肤切割创口模型研究表明，KGF-2对起始和加速外伤性创口愈合具有重要意义。

目前国内对KGF-2的开发利用尚未见诸报道，仅局限于少量的基础临床试验研究。而国外对其利用则正处于蓬勃发展之中。美国FDA已批准美国HUMANGEMNOME SCIENCES，公司(HGS)对rhKGF-2(Repifermin)进行临床试验II期研究。

Repifermin是HUMAN GEMNOME SCIENCES，Inc(HGS)开发的重组KGF-2的商品名，1998年2月开始KGF-2用于创口愈合的两个I期试验研究，一个是皮肤表面的局部用药，另一个是通过注射的全身用药。试验的目的在于评价KGF-2的安全性、药物动力学以及恰当的剂量。试验结果表明，在选定的剂量下，系统应用KGF-2是安全的，健康志愿者能够良好耐受，几乎无副作用。

2000年1月起动治疗癌症治疗(骨髓移植前高剂量化疗)相关的粘膜炎II期临床试验，早些时候已开始治疗静脉溃疡的II期临床试验。目的在于评价系统应用KGF-2的安全性和效力，2000年9月公布了治疗静脉溃疡的IIa期临床试验结果，试验考察了94名患者，其静脉溃疡面积从3-30cm²，持续了3-36个月。每周局部用药治疗两次，直到12周或者创口完全愈合，因为静脉溃疡可能需要许多个月才能完全愈合，试验中统计了部分愈合的病人数。