[发明专利]棒状细菌gnd基因的等位基因

权利要求书

1.含有编码一种多肽的基因的棒状细菌的分离株，其中所述多肽由 SEQ ID NO:2的氨基酸序列第329位的氨基酸替换为L-甲硫氨酸所构成的 氨基酸序列组成，其中所述细菌是谷氨酸棒杆菌。

2.权利要求1的棒状细菌，其中所述细菌分泌L-氨基酸。

3.权利要求2的棒状细菌，其中所述细菌分泌L-赖氨酸。

4.权利要求1-3任一项的棒状细菌，其中所述基因包含与使用从棒状 细菌获得的DNA及引物对通过聚合酶链反应（PCR）获得的多核苷酸的 核苷酸序列相同的核苷酸序列，所述引物对由第一引物和第二引物组成， 所述第一引物由选自SEQ ID NO：3的第1和226位之间的核苷酸序列的 至少15个连续核苷酸组成，所述第二引物由选自SEQ ID NO：3的第 1866和1703位之间的互补核苷酸序列的至少15个连续核苷酸组成。

5.权利要求1-3任一项的棒状细菌，其中所述基因由与SEQ ID  NO：5的核苷酸序列相同的核苷酸序列组成。

6.权利要求1-3任一项的棒状细菌，其中所述基因由在SEQ ID  NO：5中导入下列的至少一或多个置换形成的核苷酸序列组成：93位的鸟 嘌呤代替胞嘧啶、375位的腺嘌呤代替鸟嘌呤、510位的腺嘌呤代替鸟嘌 呤、612位的鸟嘌呤代替胞嘧啶、786位的鸟嘌呤代替腺嘌呤、813位的胞 嘧啶代替胸腺嘧啶、1014位的鸟嘌呤代替胸腺嘧啶、1380位的胞嘧啶代 替腺嘌呤、1470位的鸟嘌呤代替胸腺嘧啶。

7.权利要求6的棒状细菌，其中所述基因由SEQ ID NO：17的核苷 酸序列组成。

8.一种分离的多核苷酸，其中被其编码的多肽由SEQ ID NO：2的氨 基酸序列第329位的氨基酸替换为L-甲硫氨酸所构成的氨基酸序列组成。

9.权利要求8的分离的多核苷酸，其中其与使用从棒状细菌获得的 DNA和引物对通过聚合酶链反应（PCR）获得的多核苷酸的核苷酸序列相 同，所述引物对由第一引物和第二引物组成，所述第一引物由选自SEQ ID NO：3的第1和226位之间的核苷酸序列的至少15个连续核苷酸组 成，所述第二引物由选自SEQ ID NO：3的第1866和1703位之间的互补 核苷酸序列的至少15个连续核苷酸组成，其中所述细菌是谷氨酸棒杆 菌。

10.权利要求8的分离的多核苷酸，其中所述多核苷酸由与SEQ ID  NO：5的核苷酸序列相同的核苷酸序列组成。

11.权利要求8的分离的多核苷酸，其中所述核苷酸序列由在SEQ ID  NO：5中导入选自如下一组的一或多个碱基置换形成的核苷酸序列组成： 93位的鸟嘌呤代替胞嘧啶、375位的腺嘌呤代替鸟嘌呤、510位的腺嘌呤 代替鸟嘌呤、612位的鸟嘌呤代替胞嘧啶、786位的鸟嘌呤代替腺嘌呤、 813位的胞嘧啶代替胸腺嘧啶、1014位的鸟嘌呤代替胸腺嘧啶、1380位的 胞嘧啶代替腺嘌呤、1470位的鸟嘌呤代替胸腺嘧啶。

12.权利要求11的分离的多核苷酸，其中所述核苷酸序列由SEQ ID  NO：17组成。

13.一种生产重组棒状细菌的方法，其中

a)将权利要求8至12任一项的分离的多核苷酸转移进棒状细 菌，其中所述细菌是谷氨酸棒杆菌，

b)将存在于所述谷氨酸棒杆菌染色体中的、编码在氨基酸序列的 第329位具有L-缬氨酸的SEQ ID NO：2的氨基酸序列的基因置换为编码 在第329位具有L-甲硫氨酸的氨基酸序列的a）的多核苷酸，及

c)增殖步骤a)和b)获得的棒状细菌。

14.一种重组微生物，其含有权利要求8至12任一项的分离的多核 苷酸，其中所述细菌是谷氨酸棒杆菌。

15.一种载体，其含有权利要求8至12任一项的分离的多核苷酸。

16.一种重组微生物，其含有权利要求15的载体，其中所述微生物 是谷氨酸棒杆菌。