[发明专利]一种新的抗恶性疟原虫表位以及含有它的疫苗

说明书

技术领域

本发明涉及生物医学高技术中的基因的开发与应用领域。具体而言，本发明涉及一种能被恶性疟疾患者血清识别的具有多个表位的人工抗原的氨基酸序列以及编码所述的氨基酸序列的多核苷酸序列。本发明还涉及含有所述的氨基酸序列或所述的多核苷酸序列的疫苗。本发明进一步涉及所述的人工抗原在用于制备抗恶性疟原虫感染的免疫抑制剂中的应用。

背景技术

疟疾是当今世界上最致命的流行病之一。全世界有近40亿人生活在疟疾流行区，每年大约有3-5亿新的感染者出现，并且造成每年约2-4百万人死亡。在感染人类的4种疟原虫中，恶性疟原虫是造成上述死亡的元凶，因此对恶性疟疾的防治无论对流行区人口健康还是对该地区经济发展都具有重大意义。

疟原虫的生活史可简单归纳为：在人体内进行无性增殖、早期有性增殖和在蚊体内的有性增殖与孢子增殖。从雌性按蚊(Anopheles sp.)叮咬入血，到在肝细胞内发育成熟，大量裂殖子(merozoite)从破裂的肝细胞内逸出，进入血流，这时期称红前期(exoerythrocyticstage)。从血流中裂殖子侵入红细胞在其内发育增殖，到下一代疟原虫经无性繁殖反复感染红细胞，称为红(细胞)内期(erythrocyticstage)。部分进入红细胞的裂殖子在红细胞内不再进行无性分裂，而逐渐发育成为雌或雄配子体。如被雌性按蚊吸入胃内，则在蚊体内进行有性增殖，发育成熟为子孢子逸出，统称为蚊期。

疟原虫在上述不同生活周期表达多种不同的抗原蛋白。尽管研究证实减毒子孢子能够引导产生免疫保护，由于疟原虫需通过宿主体内繁殖，因此没有利用天然虫体制备疫苗的条件。对已经筛选出的疟原虫抗原蛋白的研究已证实，它们的抗原性在宿主免疫系统的压力下会不断产生变异，因此目前没有任何一种抗原的单独使用能够达到预期的保护效果。

疟疾的临床症状只发生在红内期，可引起周期性寒战高热，贫血，脾肿大，昏迷以致死亡。因此，针对红内期研制的抗疟疫苗被认为是最有效的预防途径。恶性疟原虫生活周期的复杂性，以及恶性疟原虫抗原的高度多态性，使人们把研究重点放在对保守性多表位疫苗的研制上。因此，目前明显需要一种具有高免疫原性、抗原识别多样性、同时具有高抑制率的疫苗。

发明内容

根据上述需要，本发明人构建出一种人工重组的核酸分子ES312，包含编码SEQ ID No：2所示的323个氨基酸残基的全长多肽。

因此，本发明涉及一种具有SEQ ID NO：1所示的碱基序列的多核苷酸。

本发明还涉及具有由SEQ ID NO：1所示的碱基序列编码的如SEQID NO：2所示的氨基酸序列的多肽。

本发明进一步涉及含有所述的多核苷酸的载体。

本发明进一步涉及含有所述的载体的大肠埃希氏菌(Escherichiacoli)。其是于2004年10月9日在中国科学院微生物保藏中心保藏，保藏号为CGMCC1229的大肠埃希氏菌(Escherichia coli)。

本发明进一步涉及它含有所述的多核苷酸或权利要求2所述的多肽的疫苗。

本发明进一步涉及对所述的碱基序列特异的抗体。

本发明进一步涉及对所述的多肽特异的抗体。

本发明进一步涉及所述的多核苷酸用于制备抗恶性疟原虫感染的疫苗中的用途。

本发明进一步涉及所述的多核苷酸免疫机体产生的抗体用于制备抗恶性疟原虫感染的免疫制剂中的用途。

本发明进一步涉及所述的多肽用于制备抗恶性疟原虫感染的疫苗中的用途。

本发明进一步涉及所述的多肽免疫机体产生的抗体用于制备抗恶性疟原虫感染的免疫制剂中的用途。

根据本发明提供的含有抗恶性疟原虫的多表位人工抗原的ES312疫苗与现有技术的抗恶性疟原虫疫苗相比具有高免疫原性、抗原识别多样性。另外，由所述的SEQ ID NO：1所示的碱基序列的多核苷酸和所述的SEQ ID NO：2所示的氨基酸序列的多肽所产生抗体对恶性疟原虫的体外生长具有很高的抑制效率。

保藏信息

本发明所用的重组工程菌株已于2004年10月9日在中国科学院微生物保藏中心保藏，保藏号为CGMCC1229和CGMCC1230。

附图说明

图1示出抗恶性疟原虫多表位人工抗原ES312疫苗的基因核苷酸序列的975个碱基(即SEQ ID NO：1)及其编码蛋白的323个氨基酸序列(即SEQ ID NO：2)。

图2多表位人工抗原ES312的结构组成分析。A：多表位蛋白ES312的不同种类表位的串联方式；B：多表位蛋白ES312的氨基酸序列的二级结构预测。