[其他]骨髓素的制备方法

说明书

本发明公开了一种药品－－骨髓素的制备方去。本方法所用原料为动物肋骨如猪、牛、羊肋骨，经粉碎后，用蒸馏水提取；提取液经冻融、冷冻干燥后用蒸馏水溶成浆状进行透析，透析内外液采用蒸馏水，收集透析外液，按要求配液；最后经过滤除菌、灌装、冷冻干燥、焙封制成骨髓素药品。本发明所得产品－－骨髓素用作肿瘤、白血病放射治疗和化学药物治疗的辅助药物，再生障碍贫血和免疫缺陷症的治疗药物。

本发明属于药品制备方法，涉及一种可用作肿瘤、白血病放射治疗和化学药物治疗辅助药物，再生障碍性贫血和免疫缺陷症，特别是B细胞免疫缺陷症的治疗药物-骨髓素的制备方法及临床应用。

骨髓素存在于脊椎动物红骨髓中，在七十年代初就有关于骨髓中存在一类生物活性物质，这种生物活性物质可以抑制多能干细胞进入分裂周期，从而保护了多能干细胞免受药物杀伤的报道，但是没有关于这类生物活性物质提取和制备方法的报道。1982年法国Frinde]及Guigon等人发表了一种提取制备方法。（见Cancer Research Vol.42，638，1982）他们从胎牛骨髓中分离到几种组分，其中分子量在3500以下的组分对致死量阿糖胞苷引起的小鼠毒害有保护作用。该篇文章提到的制备方法是将胎牛骨髓在pH＝7.2的磷酸盐缓冲液中搅拌均匀，在50000×g/小时下离心，取其上清液在软化水中透析一夜，将透析外液冷冻干燥，再在pH＝7.8，浓度为50mM的碳酸氢铵缓冲溶液中溶解，装柱，在Sephadex G-10柱上用相同的缓冲溶液以10毫升/小时的流速淋洗，进行柱层析分离，将洗脱液冷冻干燥，放在-20℃下保存。这种制备方法存在如下缺点：1.原料来源不易，成本昂贵;2.没有找到含红骨髓最多的骨髓;3.仅靠透析分析分子量较小的成分，没有破碎细胞的程序，质量不稳定，产率也低;4.引入一些无机盐成分。该文中未涉及这种生物活性物质的临床应用。

本发明的任务是寻求一种来源丰富、价格低廉的原料，提供一种简单、可靠、高产的制备方法，同时用于临床。

成品为类白色或微黄色冻干块状物，含蛋白质的量应为标示量的90.0～115%;

酸碱度：取本品1支加注射用水1毫升，溶解后依中国药典二部附录检查方法测pH值，应为6.0～7.5;

澄明度：取本品1支加注射用水1毫升，溶解后依中国药典二部附录检查，应符合规定;

干燥失重：取本品，以五氧化二磷为干燥剂，减压干燥至恒重，依中国药典二部附录检查，减失重量不超过5.0%;

热原：取本品2支加注射用水2毫升，依中国药典二部规定检查，剂量按家兔体重每公斤注射1毫克，结果符合规定;

安全试验：取本品1支加注射用水0.25毫升，依中国药典二部规定检查，剂量为每只小白鼠尾静脉注射0.25毫升，结果应符合规定。

本发明所得产品毒理试验如下：

慢性毒理试验：取本品1支加注射用水0.5毫升，取体重为250～350克的健康豚鼠5只，连续3日隔日腹腔注射致敏液0.5毫升。2周后，再自股静脉注射1毫升，注射后15分钟内，观察动物没有连续干咳、连续前爪抓鼻、明显竖毛、四肢发软躺卧、呼吸困难、痉挛、虚脱及死亡等现象。

急性毒理试验：取小鼠5只，自尾静脉注射本品1支于每只小鼠，相当于人体用量500～1000倍（人体正常用量为2～4毫克/50公斤次），48小时后观察小鼠没有上述不正常现象。

无菌试验：取本品1支加培养液（厌氧、需氧、霉菌）至1毫升，依中国药典二部附录检查，符合规定。

活力测定：经实验，骨髓素对多能干细胞有非常显著的抑制作用。

含量测定：取本品1支加注射用水1毫升，按Folin酚试剂法测定其蛋白含量。

本发明所得骨髓素用于临床试验结果如下：

1.骨髓素支持肺癌患者放射治疗和化学药物治疗的效果。