[发明专利]番木瓜细胞培养生产木瓜凝乳蛋白酶的方法

说明书

技术领域

本发明涉及酶，更详细地是番木瓜细胞培养生产木瓜凝乳蛋白酶的方法。

背景技术

木瓜凝乳蛋白酶在治疗骨质增生、检测血型、肿瘤辅助治疗等方面用途广泛、疗效显著。现有的木瓜凝乳蛋白酶的生产方法是从天然种植的番木瓜果实中获取木瓜乳，从中获得粗木瓜蛋白酶，再采用层析和沉淀方法从木瓜乳或粗木瓜蛋白酶中分离纯化获得木瓜凝乳蛋白酶。由于番木瓜只在热带地区才能种植，受到地理环境、气候条件等的影响，产量和质量都难于满足需要。

发明内容

本发明的目的在于针对现有技术存在的问题，提供一种番木瓜细胞培养生产木瓜凝乳蛋白酶的方法，采用植物细胞培养技术，在人工控制条件的生物反应器中进行工业化生产，不受地理环境和气候条件的影响，生产出高质量的木瓜凝乳蛋白酶。

本发明的番木瓜细胞培养生产木瓜凝乳蛋白酶的方法包括如下步骤：

(1)从番木瓜的外植体中诱导出愈伤组织；

(2)选育出木瓜细胞；

(3)培养细胞获得含木瓜凝乳蛋白酶的细胞；

(4)分离得木瓜凝乳蛋白酶。

在步骤(1)中，所述外植体可以是番木瓜的果实、种籽、叶、茎、根、芽其中一种。所述诱导是常规技术。

外植体最好用次氯酸钠、次氯酸钙、酒精、升汞其中一种或一种以上消毒剂进行消毒处理。

步骤(2)中可以采用平板筛选、或细胞团筛选、或利用物理化学因素诱导处理方法选育出木瓜细胞。

在步骤(3)中，可以在普通的植物细胞生物反应器中进行细胞培养，选择的培养基包括碳源、氮源、无机盐、和植物生长激素。在下列条件培养：温度22-32℃、PH值4-6、光照时间0-24小时/天，培养时间15-18天。

在步骤(4)中，可以采用常规分离方法，例如沉析法、超滤法等。

本发明与现有技术相比，具有如下优点：

1、生产周期短，15-18天，一个反应器每年可生产20批；

2、细胞中木瓜凝乳蛋白酶含量超过木瓜果实中木瓜凝乳蛋白酶含量；

3、在任何地区、任何气候都可以进行工业化生产，产品质量高。

具体实施方式

实施例1

(1)番木瓜的外植体选用幼果，用70％酒精消毒，诱导出愈伤组织；

(2)平板筛选出木瓜细胞；

(3)在植物细胞生物反应器中，选择的培养基包括碳源、氮源、无机盐、植物生长激素，在温度22℃、PH值4条件下培养细胞获得含木瓜凝乳蛋白酶的细胞18天；

(4)沉析分离得木瓜凝乳蛋白酶。

实施例2

(1)番木瓜的外植体选用茎，用5％次氯酸钠消毒，诱导出愈伤组织；

(2)细胞团法筛选出木瓜细胞；

(3)在植物细胞的生物反应器中，选择的培养基包括碳源、氮源、无机盐、植物生长激素，在温度325℃、PH值5.2、光照24小时/天条件下培养细胞获得含木瓜凝乳蛋白酶的细胞15天；

(4)超滤分离得木瓜凝乳蛋白酶。

实施例3

(1)番木瓜的外植体选用叶，用70％酒精消毒，再用5％次氯酸钠消毒，诱导出愈伤组织；

(2)紫外光诱变选育出优良的木瓜细胞；

(3)在植物细胞的生物反应器中，选择的培养基是碳源、氮源、无机盐、植物生长激素，在温度25℃、PH值6、光照12小时/天条件下培养细胞获得含木瓜凝乳蛋白酶的细胞16天；

(4)超滤分离得木瓜凝乳蛋白酶。