[发明专利]AFMK在制备具有自由基清除作用的药物中的应用

说明书

本发明涉及一种褪黑激素衍生物在制备具有自由基清除作用的药物中的应用。

自由基是指一类分子在最外围轨道上含有未曾成对的电子，这类分子的化学反应性非常活泼，有从其它的物质或分子获取一个电子的趋势。自由基是在生物氧化代谢过程中不可避免的附属产物。生物所利用的氧，最终有2-4％最终转变成自由基。如这些自由基逃逸出生物抗氧化防御系统，包括抗氧化酶及内外源性小分子抗氧化剂，这些自由基就会攻击生物大分子物质，如蛋白质、细胞膜、DNA，造成这些大分子的变性和损伤，最终导致细胞或生物体结构的破坏与功能的丧失。根据目前为科学家广泛接受的自由基理论，氧自由基与许多病理生理有直接或间接的联系，其中包括衰老、老年性痴呆、帕金森病、心脏病、肿瘤、风湿性关节炎、类风湿关节炎、发热性炎症、痛风等临床常见病多发病。

褪黑激素(melatonin)即N-乙酰基色胺，是人体及哺乳动物体内的内源性物质，主要由位于大脑正中部位的松果体腺生成。近年来发现褪黑激素为目前强的内源性自由基清除剂，能延长实验动物的寿命达30％，保护中枢神经系统对抗多种有毒物质的损伤，又发现对爱滋病有辅助治疗效果。褪黑激素的半衰期短，仅为约40分钟，需反复多次给药才能维持的需要的治疗浓度。褪黑激素的抗氧化作用为直接清除自由基，其通过受体介导的作用就成了副作用，例如导致嗜睡。因而，褪黑激素具有半衰期短，有一定的副作用的缺点。

本发明目的就在于克服褪黑激素半衰期短、存在一定毒副作用的缺点，提供一种化合物在制备具有强自由基清除作用的药物中的应用。

本发明是这样实现的。

本发明提供如下化合物

N¹-乙酰-N²-甲醛-5-甲氧基尿黑胺；

N¹-acetyl-N²-formyl-5-methoxykynuramine(AFMK)。

AFMK的理化性质为：无味，淡黄色结晶，易溶于水和乙醇，在室温下其化学结构稳定，分子量264。

谭等于2000年将该物质的合成及结构鉴定的有关内容发表在美杂志上(Free Redical Biology & Medicine 2000,29:1177-1185),AFMK的合成方法为褪黑激素溶于高浓度的过氧化氢中(如(30％)，避光、静置于室温下24～48小时，褪黑激素大部分被氧化成AFMK。用氯仿提取，收集氯仿，真空干燥后再溶于甲醇，通过硅胶柱层析，用乙酸乙酯洗脱，收集洗脱液，真空干燥，可获得较高纯度的AFMK(90％以上)，合成效率(生成物比反应物)约为40％。终产物经电子轰击质谱分析及H1核磁共振结构分析，证实其结构为AFMK,AFMK已被发现存在于动物体内，但是对其生物活性及功能的研究未见文献报导。

我们发现，AFMK为一类高效的抗氧化自由基清除剂。对于由自由基诱导的脂质DNA损伤及海马神经细胞的死亡具有强大的保护作用。其实验依据如下：

一、AFMK抗氧化作用的机理，双电子供给作用

能直接还原氧自由基的小分子抗氧化剂，又称为自由基清除剂，能够直接提供电子给自由基来清除这些有害的分子。因此，测定自由基清除剂的氧化——还原电位可以评估这些物质的自由基清除能力。目前一种比较新颖的方法就是用循环电压测定仪来达到这一目的。本实验在测定AFMK的供电子能力时，将50毫摩尔浓度的AFMK(10％甲醇90％磷酸缓冲液100毫摩尔，PH7.4)溶液1毫升置于微循环电压测定仪的测量室内。测定仪型号：CV-50W(生物分析系统，westlafayette公司，美国)，在操作过程中，电压-电流曲线记录在循环电压图像仪上(图一)。从图一上可见，在电压456和668毫伏处，有两个正电极电流波。这显示了AFMK可能存在着两个供电子基团。AFMK在循环电压场中能提供两个电子的特征，提示此化合物为一高效抗氧化自由基清除剂，其作用应优于经典的抗氧化剂维生素C，维生素E，谷胱甘肽等，这些传统的抗氧化剂在循环电压场中仅显示一个正电极电流，也就是只能提供一个电子去中和自由基。

二、AFMK对生物膜脂质过氧化的保护作用