[发明专利]α－琼脂糖酶及其生产方法

权利要求书

1.一种具有以下物理化学特性的α-琼脂糖酶：

(1)作用：水解3，6-脱水-L-半乳糖和D-半乳糖之间的α-1，3键；

(2)底物特异性：作用于琼脂糖和琼脂己糖以及比琼脂己糖更长的琼脂寡糖，但是对琼脂四糖没有作用；

(3)最适温度：于55℃或更低温度呈现其酶活性；以及

(4)热稳定性：于48℃处理30秒钟后保留其20％或更高活性。

2.按照权利要求1的α-琼脂糖酶，它可得自微生物TKR1-7AGα(FERM BP-6990)或微生物TKR4-3AGα(FERM BP-6991)。

3.按照权利要求1或2的α-琼脂糖酶，它包含SEQ ID NO：14氨基酸序列的第177号氨基酸至第925号氨基酸的749个残基组成的氨基酸序列、或在所述749个残基组成的氨基酸序列中取代、缺失、加入和/或插入一个或多个氨基酸的氨基酸序列。

4.按照权利要求1或2的α-琼脂糖酶，它包含SEQ ID NO：15氨基酸序列的第184号氨基酸至第950号氨基酸的767个残基组成的氨基酸序列、或在所述767个残基组成的氨基酸序列中取代、缺失、加入和/或插入一个或多个氨基酸的氨基酸序列。

5.一种基因，它编码权利要求1-4任一项定义的α-琼脂糖酶。

6.按照权利要求5的基因，它可得自微生物TKR1-7AGα(FERMBP-6990)或微生物TKR4-3AGα(FERM BP-6991)。

7.按照权利要求5或6的基因，它编码一种α-琼脂糖酶，该α-琼脂糖酶包含SEQ ID NO：14氨基酸序列的第177号氨基酸至第925号氨基酸的749个残基组成的氨基酸序列、或在所述749个残基组成的氨基酸序列中取代、缺失、加入和/或插入一个或多个氨基酸的氨基酸序列。

8.按照权利要求5或6的基因，它编码一种α-琼脂糖酶，该α-琼脂糖酶包含SEQ ID NO：15氨基酸序列的第184号氨基酸至第950号氨基酸的767个残基组成的氨基酸序列、或在所述767个残基组成的氨基酸序列中取代、缺失、加入和/或插入一个或多个氨基酸的氨基酸序列。

9.按照权利要求5或6的基因，它包含SEQ ID NO：12核苷酸序列的第529号碱基至第2775号碱基的2247个碱基组成的核苷酸序列、或在所述2247个碱基组成的核苷酸序列中取代、缺失、加入和/或插入一个或多个碱基的核苷酸序列。

10.按照权利要求5或6的基因，它包含SEQ ID NO：13核苷酸序列的第550号碱基至第2850号碱基的2301个碱基组成的核苷酸序列、或在所述2301个碱基组成的核苷酸序列中取代、缺失、加入和/或插入一个或多个碱基的核苷酸序列。

11.一种基因，它可与权利要求5-10任一项定义的基因在严格条件下杂交并编码具有以下物理化学特性的α-琼脂糖酶：

(1)作用：水解3，6-脱水-L-半乳糖和D-半乳糖之间的α-1，3键；

(2)底物特异性：作用于琼脂糖和琼脂己糖以及比琼脂己糖更长的琼脂寡糖，但是对琼脂四糖没有作用；

(3)最适温度：于55℃或更低温度呈现其酶活性；以及

(4)热稳定性：于48℃处理30秒钟后保留其20％或更高活性。

12.一种重组DNA分子，它包含权利要求5-11任一项定义的基因。

13.一种转化体，它带有权利要求12定义的重组DNA分子。

14.一种产生权利要求1-4任一项定义的α-琼脂糖酶的方法，包括培养能够产生权利要求1-4任一项定义的α-琼脂糖酶的微生物以及从所述培养物收集所述α-琼脂糖酶。

15.按照权利要求14的方法，包括培养属于微生物TKR1-7AGα(FERM BP-6990)或微生物TKR4-3AGα(FERM BP-6991)所属微生物属的微生物以及从所述培养物收集所述α-琼脂糖酶。

16.一种产生权利要求1-4任一项定义的α-琼脂糖酶的方法，包括培养权利要求13定义的转化体以及从所述培养物收集α-琼脂糖酶。

17.一种产生琼脂寡糖的方法，包括用权利要求1-4任一项定义的α-琼脂糖酶消化琼脂糖以及从获得的消化物收集琼脂寡糖。