[发明专利]利用家蚕生产非天然蚕丝的方法

权利要求书

1.一种蚕丝，其特征在于，它基本上由重组的家蚕丝素蛋白构成，所述的重组的家蚕丝素蛋白具有修饰或改变的重链和/或轻链，

其中所述的修饰或改变的重链在重组家蚕丝素蛋白的重链的N端非结晶区和C端非结晶区中保留天然家蚕丝素蛋白中相应的天然序列，并且在重组家蚕丝素蛋白的中间结晶区中插入了选自下组的外源蛋白或其片段：绿色荧光蛋白、蜘蛛拖牵丝蛋白，

和/或重组家蚕丝素蛋白的部分或全部的中间结晶区被选自下组的外源蛋白或其片段置换：蜘蛛拖牵丝蛋白、修饰的蚕丝素蛋白结晶区、蜘蛛丝-蚕丝混合丝蛋白、蜘蛛拖牵丝蛋白-绿色荧光蛋白的融合蛋白；

其中所述的修饰或改变的轻链包括在轻链的外显子中插入选自下组的外源蛋白或其片段：绿色荧光蛋白、蜘蛛拖牵丝蛋白。

2.如权利要求1所述的蚕丝，其特征在于，所述的重组家蚕丝素蛋白的全部的中间结晶区被蜘蛛拖牵丝蛋白-绿色荧光蛋白的融合蛋白所置换。

3.如权利要求1或2所述的蚕丝，其特征在于，所述的蜘蛛拖牵丝蛋白的长度为800氨基酸或更多，并且具有8个重复单元或更多。

4.如权利要求2所述的蚕丝，其特征在于，所述的蜘蛛拖牵丝蛋白-绿色荧光蛋白融合蛋白具有SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列。

5.如权利要求1所述的蚕丝，其特征在于，其中所述的重组家蚕丝素蛋白的轻链具有选自下组的修饰：

(1)在外显子2和3之间插入选自下组的外源蛋白或其片段：绿色荧光蛋白、蜘蛛拖牵丝蛋白；

(2)在外显子6和7之间插入选自下组的外源蛋白或其片段：绿色荧光蛋白、蜘蛛拖牵丝蛋白；

6.一种家蚕丝素蛋白，其特征在于，所述的家蚕丝素蛋白具有修饰或改变的重链和/或轻链，

其中所述的修饰或改变的重链是在重组家蚕丝素蛋白的重链的N端非结晶区和C端非结晶区中保留天然家蚕丝素蛋白中相应的天然序列，并且在重组家蚕丝素蛋白的中间结晶区中插入了选自下组的外源蛋白或其片段：绿色荧光蛋白，蜘蛛拖牵丝蛋白，

和/或重组家蚕丝素蛋白的部分或全部的中间结晶区被选自下组的外源蛋白或其片段置换：蜘蛛拖牵丝蛋白、修饰的蚕丝素蛋白结晶区、蜘蛛丝-蚕丝混合丝蛋白、蜘蛛拖牵丝蛋白-绿色荧光蛋白的融合蛋白；

其中所述的修饰或改变的轻链包括在轻链的外显子中插入选自下组的外源蛋白或其片段：绿色荧光蛋白、蜘蛛拖牵丝蛋白。

7.一种核酸分子，其特征在于，它编码权利要求6中所述的家蚕丝素蛋白的修饰或改变的重链和/或轻链。

8.一种载体，其特征在于，它含有权利要求7所述的核酸分子。

9.一种宿主细胞，其特征在于，它含有权利要求8所述的载体。

10.一种转基因家蚕，其特征在于，它合成、分泌、吐出权利要求1所述的蚕丝。

11.一种产生权利要求1所述蚕丝的方法，其特征在于，培养权利要求10所述的转基因家蚕使其分泌蚕丝，以获得蚕丝。

12.一种产生转基因家蚕的方法，其特征在于，包括步骤：

(a)提供一融合基因，该基因含有融合的蜘蛛拖牵丝基因和报告基因，并且在融合基因的5＇端和3＇端侧分别接家蚕丝素蛋白重链5＇端和3＇端序列，

(b)将步骤(a)中的融合基因导入家蚕的蚕卵；

(c)使步骤(b)中的蚕卵孵化、发育和结茧；

(d)鉴别基因组中整合有融合基因的家蚕，从而获得转基因家蚕。

13.如权利要求12所述的方法，其特征在于，所述的报告基因是绿色荧光蛋白；在步骤(b)中通过电穿孔法将融合基因导入家蚕的蚕卵；和步骤(d)中鉴别的进行是通过在紫外光下筛选亮茧。