[发明专利]一种新的多肽——含有DNA拓扑异构酶II特征的蛋白9.57和编码这种多肽的多核苷酸

说明书

本发明属于生物技术领域，具体地说，本发明描述了一种新的多肽——含有DNA拓扑异构酶II特征的蛋白9.57，以及编码此多肽的多核苷酸序列。本发明还涉及此多核苷酸和多肽的制备方法和应用。

DNA拓扑异构酶I(Sternglanz R.Curr.Opin.Cell Biol.1：533-535，1990；SharmaA.，Curr.Opin.Struct.Biol.5：39-47，1995；Roca J.Trends Biochem.Sci.20：156-160,1995)是催化拓扑的DNA异构体互变的两种类型之一。DNA拓扑异构酶II是ATP依赖的，它通过一个短暂的双链的破裂穿过一个DNA片段起作用DNA拓扑异构酶。DNA拓扑异构酶II存在于噬菌体，太古细菌，原核生物，真核生物和非洲猪发烧病毒(ASF)。噬菌体T4 DNA拓扑异构酶II是由三个亚基组成(基因39，52，60的产物)。在原核生物和太古生物中，此酶又有DNA促旋酶(gyr)的功能，有两个亚基(促旋酶A和B基因)。在一些细菌中，发现了第二个类型的DNA拓扑异构酶II，它被称为DNA拓扑异构酶IV，它在染色体的分离中是需要的，它有两个亚基组成(parC和parE基因)。在真核生物中，DNA拓扑异构酶II是二聚体。

在拓扑异构酶II的不同亚基之间，有许多的区域是同源的，它们的关系表示如下：＜-------------About-1400-residues------------＞[-------Protein 39-*-----][----Protein 52----]    噬菌体T4[-------gyr--------*-----][----gyrA-------------]  原核生物II

                                                 古细菌[---------parE-----*-----][-------parD------------]  原核生物IV[-----------------*-------------------------------]  真核生物and

                                                  ASF′*′：特征蛋白的位置

作为此蛋白家族的特征模式，我们发现了高度保守的五肽区域。此模式位于gyrB，parE，噬菌体T4的拓扑异构酶的蛋白质39上。保守的模式为：[LIVMA]-x-E-G-[DN]-S-A-x-[STAG]

在真核生物和原核生物的拓扑异构酶负责DNA拓扑异构体的超螺旋化与松弛态的转化。DNA拓扑异构酶II的共同特点为：同时切断，缝合DNA的两条链，不需要单链切口存在，因而每一反应后改变两个链环数；需要能量辅助因子。它没有DNA序列特异性，可以作用于任何相交的两对双链DNA。

实验表明，DNA拓扑异构酶可以作为许多潜在的抗细菌和抗肿瘤药物的靶。

本发明的多肽的蛋白序列包含DNA拓扑异构酶II的保守序列，因此认为是一种新的DNA拓扑异构酶II蛋白，如果此酶发生突变或表达异常，将影响DNA的转录，复制，重组，修复。以至于形成肿瘤等疾病。故命名为含有DNA拓扑异构酶II特征的蛋白9.57。

由于如上所述含有DNA拓扑异构酶II特征的蛋白9.57蛋白在机体内重要功能中起重要作用，而且相信这些调节过程中涉及大量的蛋白，因而本领域中一直需要鉴定更多参与这些过程的含有DNA拓扑异构酶II特征的蛋白9.57蛋白，特别是鉴定这种蛋白的氨基酸序列。新含有DNA拓扑异构酶II特征的蛋白9.57蛋白编码基因的分离也为研究确定该蛋白在健康和疾病状态下的作用提供了基础。这种蛋白可能构成开发疾病诊断和/或治疗药的基础，因此分离其编码DNA是非常重要的。

本发明的一个目的是提供分离的新的多肽——含有DNA拓扑异构酶II特征的蛋白9.57以及其片段、类似物和衍生物。

本发明的另一个目的是提供编码该多肽的多核苷酸。

本发明的另一个目的是提供含有编码含有DNA拓扑异构酶II特征的蛋白9.57的多核苷酸的重组载体。

本发明的另一个目的是提供含有编码含有DNA拓扑异构酶II特征的蛋白9.57的多核苷酸的基因工程化宿主细胞。

本发明的另一个目的是提供生产含有DNA拓扑异构酶II特征的蛋白9.57的方法。

本发明的另一个目的是提供针对本发明的多肽——含有DNA拓扑异构酶II特征的蛋白9.57的抗体。