[发明专利]具有α－半乳糖苷酶活性的多肽及其编码核酸

权利要求书

1.一种具有α-半乳糖苷酶活性的分离的多肽，其特征在于

(1)所述多肽具有与SEQ ID NO：2所示氨基酸序列至少80％相同的氨基酸序列，

(2)该多肽的α-半乳糖苷酶活性至少比具有SEQ ID NO：3所示序列之多肽的α-半乳糖苷酶活性更高。

2.权利要求1的多肽，其中所述多肽具有与SEQ ID NO：2所示氨基酸序列至少90％相同的氨基酸序列。

3.权利要求1的多肽，其中所述多肽具有与SEQ ID NO：2所示氨基酸序列至少95％相同的氨基酸序列。

4.权利要求1的多肽，其中所述多肽包含SEQ ID NO：2的氨基酸序列。

5.权利要求1的多肽，其由SEQ ID NO：2的氨基酸序列或其亚序列组成。

6.权利要求1的多肽，其可得自小果咖啡。

7.权利要求1的多肽，其可得自小果咖啡Catimor栽培品种。

8.权利要求1-7中任何一项的多肽，该多肽的α-半乳糖苷酶活性至少比具有SEQ ID NO：3所示序列之多肽的α-半乳糖苷酶活性高约25％。

9.权利要求8的多肽，该多肽的α-半乳糖苷酶活性至少比具有SEQ ID NO：3所示序列之多肽的α-半乳糖苷酶活性高约50％。

10.权利要求8的多肽，该多肽的α-半乳糖苷酶活性至少比具有SEQ ID NO：3所示序列之多肽的α-半乳糖苷酶活性高75％。

11.权利要求8的多肽，该多肽的α-半乳糖苷酶活性比具有SEQID NO：3所示序列之多肽的α-半乳糖苷酶活性至少高约100％。

12.一种包含SEQ ID NO：2所示氨基酸序列的多肽。

13.一种具有α-半乳糖苷酶活性的分离的多肽，其特征在于：

(1)所述多肽具有与SEQ ID NO：2所示氨基酸序列至少80％相同的氨基酸序列，并且

(2)将该多肽与对-硝基-苯基-α-D-吡喃半乳糖苷1.25mmol/L，pH6.5混合，26℃温育1小时后，测得的α-半乳糖苷酶活性至少高于30U/mg。

14.权利要求13的多肽，其特征在于该多肽的α-半乳糖苷酶活性至少约40U/mg所述纯多肽。

15.权利要求13的多肽，其特征在于该多肽的α-半乳糖苷酶活性至少约50U/mg。

16.权利要求13的多肽，其特征在于该多肽的α-半乳糖苷酶活性至少约62U/mg。

17.包含编码权利要求1多肽的核酸序列和/或其互补序列的分离的多核苷酸。

18.包含在SEQ ID NO：1的多肽编码核酸序列中有至少一个突变的核酸序列和/或其互补序列的分离的多核苷酸，其中所述突变核酸序列编码含有SEQ ID NO：2所示氨基酸序列的多肽。

19.包含权利要求17或18的多核苷酸，以及与之可操作连接、可指导多肽在适当表达宿主中生产的一或多个控制序列的核酸构建体。

20.一种重组表达载体，其中包含权利要求19的核酸构建体。

21.一种重组宿主细胞，其中包含权利要求19的核酸构建体。

22.根据权利要求21的重组宿主细胞，它是巴氏毕赤酵母。

23.根据权利要求21的重组宿主细胞，它是CGMCC No.0479。

24.生产权利要求1或13的多肽的方法，包括从小果咖啡中纯化该多肽。

25.权利要求24的方法，其中所述小果咖啡是Catimor栽培品种。

26.生产权利要求1-16中任一项的多肽的方法，包括(a)在适于产生该多肽的条件下，培养含有核酸构建体的宿主细胞，该核酸构建体包含编码该多肽的核酸序列；和(b)回收该多肽。

27.由权利要求24或25的方法生产的多肽。