[发明专利]一种新的多肽——人鸟嘌呤核苷转换蛋白18,35和编码这种多肽的多核苷酸

说明书

本发明属于生物技术领域，具体地说，本发明描述了一种新的多肽--人鸟嘌呤核苷转换蛋白18,35，以及编码此多肽的多核苷酸序列。本发明还涉及此多核苷酸和多肽的制备方法和应用。

从无活性的GDP束缚状态到激活的GDP状态要通过一个小G蛋白开关。由于自发的GDP释放速度非常慢，因此需要鸟嘌呤核苷转换因子(GEFs)来促进小G蛋白的快速活化并且控制其活性，从而使GDP转换成GTP。第一个转换因子是从酵母蛋白的分泌物中发现的，还存在于许多其它的蛋白中，在酵母中它是一种很大的蛋白，其中包含了一个具有交换活性的Sec7区域；在人类体内，存在一种小的蛋白，称为ARNO(分子量为47K)，也包含了一个Sec7区域，主要作用是促进ARF的鸟嘌呤核苷转换。小G蛋白ADP核糖基化作用因子1(ARF1)是一种GTP酶，能够调节胞内小泡的膜的开放并激活磷脂酶D，在高尔基体表面的囊泡的包装中起着非常重要的作用。

ARNO的Sec7区域包含了10个α-螺旋结构(A-J)，只含有很少的氢键，主要依靠疏水作用和范德华作用来保持其结构上的稳定性。Sec区域的氨基酸残基数从52-246个不等，与ARNO-Sec7的序列相比较，其它的Sec7区域包含了或多或少的的插入序列或可删除序列，几乎所有这些插入序列或可删除序列都存在于整个结构的表面部分，与螺旋结构相连接但并不影响到整个结构的完整性。ARNO-Sec7与另外一些核苷转换因子如EF-Ts,Mss4和GrpE没有类同之处，它与其它G-蛋白相关蛋白(如GTPase活化蛋白)的结构也没有联系。Sec7区域有两段高度保守的序列，分别称为Motif1和Motif2。Motif1形成一个F-G环，通过αD螺旋的紧密的内部作用保持结构上的稳定性；Motif2折叠成αH螺旋结构，除了其中一部分以αI和αJ螺旋折叠形式包藏在蛋白结构的内部以外，其它大部分都暴露在蛋白的表面上。

高尔基转运囊泡的生长发育需要不断地补充包装蛋白，这个补充过程由ADP核糖基化作用因子1(ARF1)来调节，ARF1的活性由鸟嘌呤核苷转换因子(GEFs)来促进。在哺乳动物中，包含Sec7区域的GEFs通过调节特定的ARF蛋白还能控制细胞内膜的间隔构造和功能。

根据氨基酸序列同源比较的结果，本发明的多肽含有特征性的Sec7区域，其同源蛋白为鼠的鸟嘌呤核苷转换蛋白Sec7，它的蛋白号为AL035538。因此，本发明的多肽被推断鉴定为鸟嘌呤核苷转换蛋白家族，命名为人鸟嘌呤核苷转换蛋白18。

由于如上所述人鸟嘌呤核苷转换蛋白18,35蛋白在调节细胞分裂和胚胎发育等机体重要功能中起重要作用，而且相信这些调节过程中涉及大量的蛋白，因而本领域中一直需要鉴定更多参与这些过程的人鸟嘌呤核苷转换蛋白18,35蛋白，特别是鉴定这种蛋白的氨基酸序列。新人鸟嘌呤核苷转换蛋白18,35蛋白编码基因的分离也为研究确定该蛋白在健康和疾病状态下的作用提供了基础。这种蛋白可能构成开发疾病诊断和/或治疗药的基础，因此分离其编码DNA是非常重要的。

本发明的一个目的是提供分离的新的多肽--人鸟嘌呤核苷转换蛋白18,35以及其片段、类似物和衍生物。

本发明的另一个目的是提供编码该多肽的多核苷酸。

本发明的另一个目的是提供含有编码人鸟嘌呤核苷转换蛋白18,35的多核苷酸的重组载体。

本发明的另一个目的是提供含有编码人鸟嘌呤核苷转换蛋白18,35的多核苷酸的基因工程化宿主细胞。

本发明的另一个目的是提供生产人鸟嘌呤核苷转换蛋白18,35的方法。

本发明的另一个目的是提供针对本发明的多肽--人鸟嘌呤核苷转换蛋白18,35的抗体。

本发明的另一个目的是提供了针对本发明多肽--人鸟嘌呤核苷转换蛋白18,35的模拟化合物、拮抗剂、激动剂、抑制剂。

本发明的另一个目的是提供诊断治疗与人鸟嘌呤核苷转换蛋白18,35异常相关的疾病的方法。

本发明涉及一种分离的多肽，该多肽是人源的，它包含：具有SEQ ID No.2氨基酸序列的多肽、或其保守性变体、生物活性片段或衍生物。较佳地，该多肽是具有SEQ ID NO:2氨基酸序列的多肽。

本发明还涉及一种分离的多核苷酸，它包含选自下组的一种核苷酸序列或其交体：

(a)编码具有SEQ ID No.2氨基酸序列的多肽的多核苷酸；

(b)与多核苷酸(a)互补的多核苷酸；

(c)与(a)或(b)的多核苷酸序列具有至少70％相同性的多核苷酸。