[发明专利]心脑脉通注射液的制备方法

说明书

本发明涉及一种生化注射液的制备方法。

目前，国内外较为先进的采用自体网膜移植术治疗缺血性血管病，且被广泛应用，由于人体网膜含有促进血管生长因子，是一种活性的生物制剂，因此用网膜移植术治疗人体四肢闭塞性脉管类等血管疾病具有较好的效果，但采用此种方法治疗有其不足之处：血管病的治疗必须通过手术方法进行，手术繁杂，护理困难，且疗效持续时间短，患者不易接受，给一些心血管病患者的治疗带来不便。

为解决人体心脑血管病的治疗，本发明的目的提供一种心脑血管注射液的制备方法，利用动物脏器网膜组织，经过特殊工艺流程制备一种针剂，从肌肉或静脉内注入人体，以达到对血管病之抗凝、降纤、溶栓、降粘，促进血管生长，达到有效治疗的目的。

本发明注射液制备方法工艺流程如下：

→1→2→3→4→5→6

1．原料选取；

2．组织处理、去污、破碎；

3．成份分离；

4．有效成份提取及处理；

5．有效成份测定；

6．除菌处理、包装贮存。

其详细工艺流程如下：

1．原料选取：选取家庭养殖牛心脏血管网膜、类网膜；

2．组织处理、去污、破碎：在无菌条件下取上述原料，称量去污，在无菌条件下将组织膜剪碎，加入二倍体积的汉格氏液，此液为一种细胞营养液，起营养作用，同时具有溶解作用，可以将有效成份溶解在里边，其功能是保持生物活性持久，然后加入与汉格氏液等量的1～6％十二烷基硫酸钠和1～6％乙二胺四乙酸钠，此二种物质为阴离子去污剂及细胞解离剂，最后用组织破碎机将有机组织破碎；

3．成份分离：将破碎的组织用高速离心机3000g/分，运行30分钟，使有效成份分离；

4．有效成份提取及处理：将含有完整细胞沉淀物取出，按组织重量5倍加入汉格氏液，然后再加入6％十二烷基硫酸钠和6％乙二胺四乙酸钠，使其溶解，存放在4℃的条件下反应48小时，再用离心机，以7000g/分分离，运行30分钟，分离后上清呈乳白色状态，取上清，按上清5倍体积加入提取生物制剂的有机溶剂三氯甲烷，放0℃下存放一小时再取出，再用离心机以3000g/分，运行30分钟，取出紊状物，呈稠状，用冷丙酮洗二次，再用冷无水乙醇洗4～5次，再用胰酶酶解；

5．有效成份测定：取沉淀，按每100克组织加入400ml的无菌无热源不含毒素杂质的汉格氏液，加入20ml的葡萄糖溶液，使其溶解，呈无色透明状态，用葡萄糖凝胶，采用设备型号为G75、G25分子筛过柱，实际是进行筛分过程，将收集的液体用凯氏定氮法将含氮蛋白量调至2mg/ml标准浓度，收集蛋白类吸收峰，大规模生产时采用粗滤、超滤过程，粗滤应用圆筒式过滤器，0.45μm和0.22μm滤板粗滤，将粗滤液用2万分子量的超滤膜超滤；

6．除菌处理：将该液体用G6除菌器设备除菌，按注射液标准重量封装，放在4℃的温度下保存，即可包装、贮存和使用。

此种药剂有效成份为小分子蛋白，含有少量胺基酸，还有多肽类和少量稀有金属等血管活性物质及有效酚酶系统。

本发明血管病针剂药物制取的优点：原料来源广泛，在实验室内都可生产；工艺简单、无须特殊设备，所制药物疗效高、持续时间长，无须手术，只需肌肉注射，容易接受，效果突出，特别对治疗脉管炎、动脉炎、雷诺氏病、下肢静脉炎等疾病都有显著疗效。

实施例1

取牛的新鲜心脏250克，经过冷冻、解冻数次后再用无菌生理盐水洗二次，然后将心脏剪碎，加入500克汉格氏液(比重近似为1)，再加入15克十二烷基硫酸钠和15克乙二胺四乙酸钠，然后用组织破碎机破碎，将破碎后的组织用高速离心机以3000g/分，运行30分钟，将沉淀取出200克，加入1000克汉格氏液，加入60克十二烷基硫酸钠和60克乙二胺四乙酸钠，使其溶解，放在4℃冰箱内存48小时，取出后再用离心机以3000g/分，运行30分钟，取上清加入1000克三氯甲烷放零度以下存放一小时，再用离心机离心3000g/分，运行30分钟，取出紊状物用冷丙酮适量洗二次，再用无水乙醇洗5次，取沉淀100克加入400ml的无菌无热源汉格氏液，加入20ml葡萄糖，使其溶解，用葡聚糖凝胶，采用设备型号为G75、G25分子筛过柱，筛分，将收集的液体用凯氏定氮法将含氮蛋白量加入适量的蒸流水调至2mg/ml标准浓度收集蛋白类吸收峰，用除菌器设备除菌，最后按注射液标准计量分装，低温4℃保存备用。

实施例2

用牛的肠系膜组织为原料，方法同上。

本产品在实验室内进行多次小批量生产，经几年的临床应用，治疗效果非常明显，得到医院临床的确认，无任何副作用，适合患心脑血管疾病患者临床应用。