本发明公开了一种靶向Trypsin‑9基因的miR‑283‑3p及其应用,所述miR‑283‑3p序列如SEQ ID NO:1所示,Trypsin‑9基因序列如SEQ ID NO:2所示。并验证了miR‑283‑3p负调控Trypsin‑9的表达,进一步利用SDS‑PAGE电泳检测了高表达和抑制miR‑283‑3p的表达后,中肠液对原毒素Cry1Ac的活化作用,明确了miR‑283‑3p靶向Trypsin‑9可介导原毒素Cry1Ac的活化作用,可应用miR‑283‑3p作为分子靶标来防控小菜蛾等十字花科蔬菜害虫。