本发明公开了一种耐高温L-阿拉伯糖异构酶,它具有如SEQ ID NO:2所示的氨基酸序列。本发明还公开了编码上述耐高温L-阿拉伯糖异构酶的基因序列,以及包含上述L-阿拉伯糖异构酶的基因工程菌及其构建方法,上述L-阿拉伯糖异构酶的表达方法,及上述L-阿拉伯糖异构酶和基因工程菌在制备D-塔格糖中的应用本发明的耐高温L-阿拉伯糖异构酶的反应温度为40~70℃,反应pH为5.5~7.5。该重组酶显示出良好的热稳定性与pH耐受性,且低浓度Mn2+、Co2+离子的添加可以大幅提高酶活力和热稳定性,该耐高温L-阿拉伯糖异构酶对于新型功能性甜味剂D-塔格糖的工业化生产具有广泛的应用前景和经济意义