本发明涉及一种牛痘病毒加帽酶突变体、重组载体、重组工程菌及其应用。该牛痘病毒加帽酶突变体包括：(a)、由如SEQ ID No.2所示的氨基酸序列缺失、替代或增加一个或多个氨基酸组成的多肽；或，(b)、与如SEQ ID No.2所示的氨基酸序列组成的多肽具有至少90％同源性的多肽上述牛痘病毒加帽酶突变体在45℃下的半衰期在35min以上，高于野生型牛痘病毒加帽酶突变体的半衰期，在较高的温度下对mRNA加帽时，仍然表现出优良的的催化活性，在临床医药、流感疫苗、肿瘤疫苗、生物制药等领域都能发挥重要作用
本发明公开了重组羊痘病毒融合蛋白及其应用。该重组羊痘病毒融合蛋白是a)、b)或c)的蛋白质：a)氨基酸序列是SEQ ID No.2第8‑629位氨基酸残基的蛋白质；b)氨基酸序列是SEQ ID No.2的蛋白质；c)将SEQ ID No.2所示的氨基酸序列经过一个或几个氨基酸残基的取代和将该重组羊痘病毒融合蛋白作为包被抗原建立的间接ELISA检测羊痘病毒抗体的方法不仅可用于羊痘的诊断，而且可评价疫苗免疫效果，此外，该方法可快速准确的检测羊痘。
本发明公开了一种gRNA，所述gRNA序列如SEQ ID NO：1或SEQ ID NO：2所示，本发明还公开了重组质粒、ORF016基因缺失型山羊痘病毒株及其制备方法和应用。本发明首次通过基因敲除方法获得了ORF016基因缺失型山羊痘病毒株，该方法是首次将CRISPR技术在山羊痘病毒中进行应用，同时本发明采用了反向转染方法对ORF016基因进行了敲除，该方法的敲除效率达到了同时，本发明所获得的SDLVDUORF016毒株是一株仅缺失ORF016的毒株，基因的缺失对其生长特性没有影响，该毒株可用于山羊痘疫苗、检测试剂、山羊痘病毒鉴定等用途。
