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[发明专利]一种生物素标记无机焦磷酸酶的制备方法-CN201510416726.8有效
发明人：高静;蔡亦梅;徐潇;吴超;张睿;王者馥;王绪敏;殷金龙;任鲁风 -专利权人：北京中科紫鑫科技有限责任公司
申请日： 2015-07-16 - 公布日： 2015-11-18 - 主分类号： C12N9/14 文献下载
摘要：本发明属于生物技术领域，具体涉及一种生物素标记无机焦磷酸酶的制备方法。步骤如下：溶解无机焦磷酸酶，活化生物素，结合无机焦磷酸酶，透析，测定蛋白含量，保存。本发明制备得到的无机焦磷酸酶，非常适合应用于焦磷酸测序反应中，无机焦磷酸酶的高活性可确保测序反应的准确度。
一种生物素标记无机磷酸酶制备方法

[发明专利]一种焦磷酸酶活性检测方法-CN202010430310.2有效
发明人：张卫;符伟杰;杨博玥;孙奕;魏广;熊陈;郭丽丽;王轶群 -专利权人：水利部南京水利水文自动化研究所
申请日： 2020-05-20 - 公布日： 2023-09-08 - 主分类号： C12Q1/34 文献下载
摘要：本发明公开了一种简单、快速地检测焦磷酸酶活性方法，在未加入焦磷酸酶，只有底物焦磷酸盐存在时，焦磷酸盐能够稳定硫化镉形成量子点，具有较强的荧光强度；当焦磷酸酶存在时，焦磷酸酶能够水解焦磷酸盐使得形成的硫化镉量子点减少，反应体系的荧光强度降低且荧光强度和加入的焦磷酸酶的活性之间存在线性关系；本发明具有操作简单、分析速度快、成本低，灵敏度高等优点。
一种磷酸酶活性检测方法

[发明专利]一种基于催化反应原位荧光检测无机焦磷酸酶的方法-CN201910597068.5有效
发明人：刘金华;陈灿;张承武 -专利权人：南京工业大学
申请日： 2019-07-02 - 公布日： 2023-04-18 - 主分类号： G01N21/64 文献下载
摘要：本发明涉及一种基于原位荧光反应检测无机焦磷酸酶的方法，属于纳米生物传感技术领域。该方法包括：多巴胺、间苯二胺和铜离子发生原位荧光反应发出绿色的荧光；焦磷酸根离子能够络合铜离子，使原位荧光反应不能发生，出现荧光淬灭的现象；无机焦磷酸酶能够水解焦磷酸根离子，使原位荧光反应发生，出现荧光增强的现象，基于此实现对无机焦磷酸酶的检测。此外，该方法还能够应用于无机焦磷酸酶抑制剂的筛选以及在复杂体系中对无机焦磷酸酶的检测。本发明中的基于原位荧光反应检测无机焦磷酸酶的方法合成条件温和、合成步骤简便、荧光强且生物相容性高，而且该方法对无机焦磷酸酶的检测具有分析快速、选择性好和灵敏度高等优点。
一种基于催化反应原位荧光检测无机磷酸酶方法

[发明专利]一种高酶活无机焦磷酸酶突变体及其制备方法和应用-CN202310463416.6在审
发明人：张亮亮;韦威;李胤直;施林峰;武俊红;姚红;王伟文 -专利权人：核芯生物医药科技（杭州）有限公司;核芯医药（山东）有限公司
申请日： 2023-04-26 - 公布日： 2023-08-08 - 主分类号： C12N9/14 文献下载
摘要：本发明公开了一种高酶活无机焦磷酸酶突变体及其制备方法和应用，属于生物技术领域。所述无机焦磷酸酶突变体是由来源于酵母Saccharomyces cerevisiaeS288C的野生型无机焦磷酸酶的氨基酸序列中的第91位的异亮氨酸被苏氨酸取代、第150位的甘氨酸被天冬氨酸取代制得。与野生型无机焦磷酸酶相比，该突变体的催化活性提高了2倍以上。本发明还提供了一种分离纯化所述无机焦磷酸酶突变体的方法，制备的无机焦磷酸酶纯度高、酶活高。
一种高酶活无机磷酸酶突变体及其制备方法应用

[发明专利]一种耐热性增强的NADH焦磷酸酶突变体及应用-CN202310875031.0在审
发明人：丁雪峰;钱明;靳思雨;高顾杰;彭朋 -专利权人：南京朗恩生物科技有限公司
申请日： 2023-07-17 - 公布日： 2023-10-20 - 主分类号： C12N9/14 文献下载
摘要：本发明涉及酶催化技术领域，尤其是一种耐热性增强的NADH焦磷酸酶突变体及应用，该NADH焦磷酸酶突变体的氨基酸序列如SEQ ID NO：1所示。使用时，取NADH干粉，加入MgCl2、MnCl2和Tris‑HCl，加入NADH焦磷酸酶突变体的粗酶液，30～60℃该NADH焦磷酸酶突变体与野生型NADH焦磷酸酶相比，可应用于高温催化NADH，表现出更强的热稳定性。
一种耐热性增强 nadh 磷酸酶突变体应用

[发明专利]一种检测焦磷酸酶的荧光传感器及其制备方法-CN201410547685.1有效
发明人：林振宇;徐可丰;郭隆华;邱彬;陈国南 -专利权人：福州大学
申请日： 2014-10-16 - 公布日： 2014-12-24 - 主分类号： G01N21/64 文献下载
摘要：本发明公开了一种检测焦磷酸酶的荧光传感器及其制备方法，在未加入焦磷酸酶，只有焦磷酸存在时，焦磷酸与二价铜形成络合物，抗坏血酸钠不能够还原络合的二价铜为一价铜作为催化剂，叠氮香豆素和丙炔醇也不能发生1,3-偶极环加成反应，从而体系的荧光强度很低；但是在同时加入焦磷酸酶的情况下，焦磷酸酶能够水解焦磷酸抑制二价铜络合物的形成，点击化学反应能够继续发生，体系的荧光强度大幅争强且荧光强度与加入的焦磷酸酶的量存在线性关系该传感器成功地应用于焦磷酸酶抑制剂氟化钠的检测，本发明具有操作简单、成本低、灵敏度高、特异性好等优点。
一种检测磷酸酶荧光传感器及其制备方法

[发明专利]一种检测无机焦磷酸酶的荧光传感器及其制备方法-CN201711409767.X有效
发明人：邱彬;胡水生;郭隆华;林振宇;陈国南 -专利权人：福州大学
申请日： 2017-12-23 - 公布日： 2019-06-07 - 主分类号： G01N21/64 文献下载
摘要：本发明属于金属有机骨架材料用于疾病标记物的分析检测领域，具体涉及一种检测无机焦磷酸酶的荧光传感器及其制备方法。通过将不同浓度的无机焦磷酸酶溶液与焦磷酸盐反应后，加入Cu‑BDC‑MOF纳米片溶液、过氧化氢溶液与对苯二甲酸溶液，于37℃下孵育30分钟，检测不同浓度无机焦磷酸酶存在下的荧光信号，构建工作曲线，制得荧光传感器先利用荧光传感器检测样品中无机焦磷酸酶的荧光信号，然后与工作曲线对应，实现了对样品中无机焦磷酸酶的定量分析。该检测方法选择性高、快速、灵敏、高效。
一种检测无机磷酸酶荧光传感器及其制备方法

[发明专利]一种黑磷介导铜离子聚集的电化学信号转换的磷酸酶活性检测方法-CN201811564153.3在审
发明人：聂华贵;王宇;杨植;侯俊婕;孔素珍;詹迎新;郑仙诺;丁欣慰;黄少铭 -专利权人：温州大学
申请日： 2018-12-20 - 公布日： 2019-04-12 - 主分类号： G01N27/30 文献下载
摘要：本发明属于磷酸酶活性检测领域，具体涉及一种黑磷介导铜离子聚集的电化学信号转换的磷酸酶活性检测方法，包括以下步骤：将焦磷酸、待测活性的无机焦磷酸酶混合反应，然后加入铜盐，继续反应，得到待测反应液，然后通过黑磷检测铜离子的电化学信号本发明中黑磷介导铜离子聚集的电化学信号转换的磷酸酶活性传感技术用于检测焦磷酸酶活性。该方法简单易操作，在均相溶液中操作，使用了与生理条件相一致的天然底物PPi并结合了黑磷纳米材料对铜离子的特异性吸附性质，可以实现对焦磷酸酶的灵敏检测。
铜离子黑磷电化学信号磷酸酶活性介导检测转换无机焦磷酸酶电化学响应特异性吸附传感技术混合反应检测领域焦磷酸酶均相溶液灵敏检测纳米材料生理条件天然底物焦磷酸磷酸酶对焦铜盐

[发明专利]一种碱性磷酸酶的室温磷光检测方法及应用-CN201911178138.X在审
发明人：卫艳丽;秦国杰;左力翔;王丽;董川 -专利权人：山西大学
申请日： 2019-11-27 - 公布日： 2020-04-10 - 主分类号： C12Q1/42 文献下载
摘要：一种碱性磷酸酶的室温磷光检测方法及应用，属于碱性磷酸酶的检测技术领域，可解决现有碱性磷酸酶的检测过程复杂，成本高以及干扰大的问题。室温下，本发明利用制备的β‑环糊精修饰的Mn:ZnS室温磷光量子点为磷光探针，焦磷酸根为分子识别单元，通过检测加入碱性磷酸酶后体系的室温磷光变化实现对焦磷酸酶的分析检测。该磷光检测体系对焦磷酸酶的响应范围为0.22‑10.4 U/L，检出限为0.045 U/L。可用于血清中碱性磷酸酶的检测，且在测定时无需复杂的样品预处理过程。
一种碱性磷酸酶室温磷光检测方法应用

[发明专利]硫化叶菌病毒脱氧尿苷焦磷酸酶和此酶应用研究-CN201310350378.X无效
发明人：朱国东 -专利权人：云南民族大学
申请日： 2013-08-13 - 公布日： 2014-07-09 - 主分类号： C12N9/14 文献下载
摘要：本发明公开了病毒脱氧尿苷焦磷酸酶和编码这种酶的多核苷酸，以及该酶的应用，该脱氧尿苷焦磷酸酶分离自硫化叶菌病毒Z。脱氧尿苷焦磷酸酶（dUTPase）是一种重要的DNA修饰酶，能够降低细胞中的dUTP／dTTP比例，防止DNA复制过程中dUTP浓度过高而引起错误掺入，提高DNA复制的稳定性。
硫化病毒脱氧尿苷焦磷酸酶应用研究

[发明专利]一种催化性能提高的NADH焦磷酸酶突变体及其应用-CN202310296032.X在审
发明人：龚劲松;刘烨;乔治·马歇尔;许正宏;史劲松;徐国强;苏畅;李恒 -专利权人：赛诺根生物科学有限公司;江南大学
申请日： 2023-03-23 - 公布日： 2023-06-23 - 主分类号： C12N9/14 文献下载
摘要：本发明公开了一种催化性能提高的NADH焦磷酸酶突变体及其应用。本发明提供了一种优化的NADH焦磷酸酶，其催化性能较优化前得到了提高。在此基础上，本发明通过定点突变，还提供了一种催化性能提高的NADH焦磷酸酶突变体。此外，本发明还提供了进一步提高所提供的优化的NADH焦磷酸酶及其突变体的催化性能的方法，在构建其重组质粒时，通过在质粒中插入特定的启动子序列和核糖体结合位点等，可以使诱导表达所得的NADH焦磷酸酶的催化性能较亲本更高本发明提供的优化的NADH焦磷酸酶及其突变体不仅催化性能高，还具有良好的热稳定性，可用于还原型烟酰胺单核苷酸的生物合成，适合于工业化生产和应用。
一种催化性能提高 nadh 磷酸酶突变体及其应用

[发明专利]一种生物素化无机焦磷酸酶的储存试剂-CN201511025489.9有效
发明人：高静;蔡亦梅;吴超;徐潇;张睿;王者馥;王绪敏;殷金龙;任鲁风 -专利权人：北京中科紫鑫科技有限责任公司
申请日： 2015-12-31 - 公布日： 2017-04-05 - 主分类号： C12N9/14 文献下载
摘要：本发明提供了一种生物素化无机焦磷酸酶的储存试剂，该储存试剂包括以下组分pH8.5的Tris‑HCl 60～90mM、氯化钙25～75mM、氯化镁25～75mM、乙二醇20～35％(v/v)和DTT 2～本发明提供的储存试剂对生无机焦磷酸酶活性有保护作用，能够延长生物素化无机焦磷酸酶的储存时间，减少反复冻融对其活性的影响；还能够有效减少无机焦磷酸酶上生物素标签的脱落。
一种生物素无机磷酸酶储存试剂

[发明专利]疥螨无机焦磷酸酶的应用以及诊断疥螨病的试剂盒-CN201710675600.1有效
发明人：杨光友;徐璟;古小彬;谢跃;彭雪蓉 -专利权人：四川农业大学
申请日： 2017-08-09 - 公布日： 2019-03-08 - 主分类号： G01N33/573 文献下载
摘要：本发明涉及生物技术领域，本发明提供了疥螨无机焦磷酸酶作为疥螨病诊断抗原的应用，相关实验结果显示，疥螨无机焦磷酸酶能被自然感染疥螨的兔阳性血清识别，兔疥螨总蛋白可以被兔抗疥螨无机焦磷酸酶的高免血清识别，具有良好的免疫原性，同时在间接ELISA方法中表现出极高敏感性和特异性，对早期疥螨病具备极高的检出率，种种结果证明疥螨无机焦磷酸酶可以作为疥螨病的诊断抗原，特别是在对早期疥螨病的诊断中。
无机磷酸酶应用以及诊断疥螨病试剂盒

[发明专利]一种基于铜离子响应焦磷酸根的碱性磷酸酶或甲胎蛋白检测方法-CN202210076454.1有效
发明人：于丽;台文君;宓静如;吴达;刘金鹏 -专利权人：山东大学
申请日： 2022-01-24 - 公布日： 2023-09-15 - 主分类号： G01N33/574 文献下载
摘要：本发明涉及一种基于铜离子响应焦磷酸根的碱性磷酸酶或甲胎蛋白检测方法。包括步骤如下：(1)制备海藻酸铜水凝胶和焦磷酸钠溶液；(2)制备梯度浓度的碱性磷酸酶标准溶液和甲胎蛋白标准溶液；(3)绘制碱性磷酸酶标准曲线；(4)绘制甲胎蛋白标准曲线；(5)检测待测样品中碱性磷酸酶和甲胎蛋白的含量本发明提供的基于铜离子响应焦磷酸根的碱性磷酸酶或甲胎蛋白检测方法，具有操作过程简单，成本低，试剂消耗少等优点，碱性磷酸酶的检测限为1.7mU/mL，甲胎蛋白的定量检测限为0.8ng/mL，有效地解决了现有检测方法复杂
一种基于离子响应磷酸碱性磷酸酶蛋白检测方法

[发明专利]一种高温高pH条件下制备还原型烟酰胺单核苷酸的工艺-CN202310875029.3在审
发明人：丁雪峰;钱明;靳思雨;高顾杰;彭朋 -专利权人：南京朗恩生物科技有限公司
申请日： 2023-07-17 - 公布日： 2023-10-10 - 主分类号： C12P19/30 文献下载
摘要：本发明涉及酶催化技术领域，尤其是一种高温高pH条件下制备还原型烟酰胺单核苷酸的工艺，具体为：取NADH干粉，加入MgCl2、MnCl2和Tris‑HCl，pH为7.5～10.0，加入NADH焦磷酸酶突变体的粗酶液，30～60℃反应，所述NADH焦磷酸酶突变体的氨基酸序列如SEQ ID NO：1所示。采用该NADH焦磷酸酶突变体可应用于高温高pH条件下制备还原型烟酰胺单核苷酸；与野生型NADH焦磷酸酶相比，表现出更强的耐碱性。
一种高温 ph 条件下制备原型烟酰胺单核苷酸工艺

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