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[发明专利]一种模拟cfDNA甲基化标准品的制备方法及其应用-CN202211351386.1在审
发明人：顾凯丽;陆亚红;邓啸;蒋泽宇;张亚飞 -专利权人：迈杰转化医学研究（苏州）有限公司
申请日： 2022-10-31 - 公布日： 2023-03-03 - 主分类号： C12Q1/6806 文献下载
摘要：本发明提供了一种模拟cfDNA甲基化标准品的制备方法及其应用，制备方法包括：将甲基转移酶缺陷型细胞系的基因组DNA进行全基因组扩增，获得完全未甲基化DNA样品；将完全未甲基化DNA样品进行打断处理并进行磁珠分选纯化，获得类似天然cfDNA片段长度分布的完全未甲基化模拟cfDNA样品；将所述完全未甲基化模拟cfDNA样品进行甲基转移酶处理，获得完全甲基化模拟cfDNA样品；将所述完全未甲基化cfDNA样品和完全甲基化cfDNA样品按比例混合，得到一系列不同甲基化水平的模拟cfDNA甲基化标准品。所述标准品制备方法简单，与肿瘤中相关cfDNA具有类似的片段分布，甲基化水平可控，可根据需求灵活定制。
一种模拟 cfdna 甲基化标准制备方法及其应用

[发明专利]一种用于定量检测EB病毒Cp启动子甲基化的试剂盒-CN202210182834.3有效
发明人：曹素梅;吴智聪;谢尚杭;林冬丰 -专利权人：广州凯普医药科技有限公司
申请日： 2022-02-25 - 公布日： 2022-12-30 - 主分类号： C12Q1/70 文献下载
摘要：本发明提供了一种用于定量检测EB病毒Cp启动子甲基化的试剂盒。所述试剂盒包括用于扩增EB病毒Cp启动子序列的特异性引物、甲基化与未甲基化检测Taqman探针、50％甲基化标准品、亚硫酸氢盐转化质控品、EB病毒Cp启动子100％甲基化标准品和100％未甲基化标准品。利用本发明所述试剂盒定量检测时，无需进行巢式预扩增反应，也无需分开检测甲基化和未甲基化序列，只需将转化后的DNA加入到反应体系中，即可在一管反应中同时检测甲基化和未甲基化序列，快速、简便，克服了现有鼻咽癌筛查指标阳性预测值低
一种用于定量检测 eb 病毒 cp 启动子甲基化试剂盒

[发明专利]一种基于MassARRAY的甲基化水平检测方法-CN202211708700.7在审
发明人：董辉;周宏骏;张夏燕;袁稳;金维荣;秦红友 -专利权人：申友基因组研究院（南京）有限公司
申请日： 2022-12-29 - 公布日： 2023-08-29 - 主分类号： C12Q1/6858 文献下载
摘要：本发明公开了一种基于MassARRAY的甲基化水平检测方法，包括以下步骤：（1）通过提取得到待测样本的DNA；（2）对DNA进行亚硫酸氢盐转化；（3）对甲基化片段和未甲基化片段，同时进行特异性的多重PCR扩增反应；（4）进行虾碱性磷酸酶反应；（4）延伸反应同时得到甲基化位点和未甲基化位点的延伸产物；（5）用树脂进行纯化脱盐；（6）MassARRAY飞行时间质谱；（7）根据甲基化位点和未甲基化位点的HEIGHT数据，计算CpG位点的甲基化率，并判断其甲基化是否异常；本发明适用于检测基因的甲基化水平，是一种新的检测方法，可以高通量检测多个基因的多个CpG位点和多个样本，降低成本。
一种基于 massarray 甲基化水平检测方法

[发明专利]Line-1基因甲基化定量检测方法-CN201310106663.7无效
发明人：张长松;凌扬;朱长太;朱静;刘永萍;孔颖泽 -专利权人：常州市肿瘤医院
申请日： 2013-03-28 - 公布日： 2013-08-21 - 主分类号： C12Q1/68 文献下载
摘要：本发明公开了一种Line-1基因甲基化定量检测方法，具有如下步骤：①对待测样本进行处理，得到样本模板；②设计并合成Line-1基因甲基化引物和Line-1基因未甲基化引物；③分别用步骤②的甲基化引物和未甲基化引物对步骤PCR扩增反应，并分别得到相应的PCR扩增产物；④对分别对步骤③得到的PCR扩增产物进行处理，并分别得到相应的标准品模板；⑤分别对步骤①的样本模板以及步骤④的标准品模板进行实时荧光定量PCR检测，并计算出甲基化程度本发明针对Line-1基因设计出了甲基化引物和未甲基化引物，这样可以利用MSP法和实时荧光定量PCR法对Line-1基因甲基化进行定性定量检测。
line 基因甲基化定量检测方法

[发明专利]与质量分析结合的甲基化特异性扩增产物的碱基特异性切割-CN200580017164.4无效
发明人：马蒂亚斯·埃里希;迪克尔·约翰内斯·范德博姆 -专利权人：斯昆诺有限公司
申请日： 2005-03-24 - 公布日： 2008-07-30 - 主分类号： C12P19/34 文献下载
摘要：本发明提供了方法、组合物和试剂盒，该方法、组合物和试剂盒用于鉴定靶核酸分子的甲基化状态、靶核酸分子中核苷酸基因座的甲基化状态，或者用于鉴定靶核酸分子中一个或多个甲基化或未甲基化核苷酸的基因座。甲基化状态通过以下方式进行：用可修饰靶核酸分子中一个或多个核苷酸作为靶核酸分子甲基化状态的函数的试剂处理甲基化的靶核酸分子，甲基化特异性扩增靶核酸分子、断裂扩增产物并且检测一个或多个片段，从而鉴定靶核酸分子的甲基化状态、靶核酸分子中核苷酸基因座的甲基化状态、或者靶核酸分子中一个或多个甲基化或未甲基化的核苷酸的基因座。
质量分析结合甲基化特异性扩增产物碱基切割

[发明专利]甲基化的免疫刺激性寡核苷酸和利用这些寡核苷酸的方法-CN03816229.6无效
发明人：英·K·塔姆;肖恩·森普尔;桑德拉·克利穆克;加尼亚·奇克 -专利权人：伊内克斯药物公司
申请日： 2003-05-12 - 公布日： 2005-09-07 - 主分类号： A61K39/39 文献下载
摘要：本发明发现，通过将核苷酸包裹在脂质颗粒中，可使甲基化核酸，尤其是甲基化寡核苷酸，更尤其是含有甲基化胞嘧啶CPG二核苷酸基元的甲基化寡核苷酸在体内具有免疫刺激活性。本发明还发现，通常在体内不具备免疫刺激性的包裹甲基化核酸，能与其包裹的未甲基化对应物同样有效或者比其包裹的未甲基化对应物更有效。
甲基化免疫刺激性寡核苷酸利用这些方法

[发明专利]靶向甲基化测序文库的构建方法及试剂盒-CN202210095196.1有效
发明人：余丽萍;冀长泉;汪彪;胡玉刚;吴强 -专利权人：纳昂达（南京）生物科技有限公司
申请日： 2022-01-26 - 公布日： 2023-04-07 - 主分类号： C12Q1/6806 文献下载
摘要：本发明公开了一种靶向甲基化测序文库的构建方法及试剂盒。其中，该构建方法包括：甲基化文库的构建及靶向甲基化文库杂交捕获的步骤，其中，甲基化文库的构建包括：对片段DNA进行末端修复，甲基化接头连接，将接头连接产物中未甲基化的C碱基转化成U碱基，使用能够识别U碱基的扩增酶进行PCR扩增，得到甲基化文库；靶向甲基化文库杂交捕获包括取甲基化文库进行混样、浓缩，甲基化文库杂交，甲基化文库热洗脱，甲基化文库常温洗脱，靶向甲基化文库扩增和靶向甲基化文库纯化，纯化完成的靶向甲基化文库即为靶向甲基化测序文库应用本发明的技术方案，提供了一种靶向甲基化测序文库的构建方法，该方法更适用于甲基化文库的靶向捕获。
靶向甲基化序文构建方法试剂盒

[发明专利]未甲基化核酸的选择性积累-CN201080054931.X在审
发明人：克里斯蒂安·科哈格;安德烈亚斯·梅尔 -专利权人：凯杰有限公司
申请日： 2010-11-23 - 公布日： 2012-08-15 - 主分类号： C12Q1/68 文献下载
摘要：本发明涉及对DNA的未甲基化序列进行选择性扩增的方法，所述方法包含下列步骤：（i）提供包含在至少一个位点处被甲基化的DNA的样品，（ii）用甲基化依赖性核酸酶处理样品中的DNA，以及（iii）使用甲基化依赖性核酸酶扩增切开的本发明的方法可用于选择性制备（选择性积累）基因组DNA的未甲基化序列区段，并用于分析基因组DNA中的整体甲基化模式。
甲基化核酸选择性积累

[发明专利]DNA甲基化测序文库及制备方法和DNA甲基化检测方法-CN202111398632.4在审
发明人：陈澍宜 -专利权人：竹石生物科技（苏州）有限公司
申请日： 2021-11-24 - 公布日： 2022-01-25 - 主分类号： C12Q1/6806 文献下载
摘要：本申请公开了一种DNA甲基化测序文库及制备方法和DNA甲基化检测方法。本申请在建立测序文库时采用全甲基化的dNTP对双链DNA进行末端修复，然后利用酶转化和PCR扩增来建立DNA甲基化测序文库，因此，本申请能够避免仅采用未甲基化的dNTP进行末端修复时所带来的测序数据冗余现象另外，末端修复后所引入的甲基化水平很容易从甲基化检测结果中进行剔除，故本申请虽然进行了末端修复，但是最终不会产生由于末端修复而导致的甲基化信息干扰，从而不会造成甲基化水平失真现象。
dna 甲基化序文制备方法检测

[发明专利]用于检测甲基化DNA的试剂盒和方法-CN201110052338.8有效
发明人： M·雷里 -专利权人：塞昆纳姆股份有限公司
申请日： 2005-11-28 - 公布日： 2011-10-19 - 主分类号： C12Q1/68 文献下载
摘要：本发明涉及检测甲基化DNA的体外方法，其包括(a)用能够结合甲基化DNA的多肽包被容器；(b)将所述多肽与含有甲基化和/或未甲基化DNA的样品接触；和(c)检测所述多肽与甲基化DNA的结合。在优选实施方案中，所述方法还包括步骤(d)通过测序分析所检测的甲基化DNA。本发明的另一方面是用于根据本发明的方法检测甲基化DNA的试剂盒，其包含(a)能够结合甲基化DNA的多肽；(b)可以用所述多肽包被的容器；(c)包被所述容器的手段；和(d)检测甲基化DNA的手段。
用于检测甲基化 dna 试剂盒方法

[发明专利]用于检测甲基化DNA的试剂盒和方法-CN200580047184.6有效
发明人： M·雷里 -专利权人：雷根斯堡大学临床中心
申请日： 2005-11-28 - 公布日： 2008-02-13 - 主分类号： C12Q1/68 文献下载
摘要：本发明涉及检测甲基化DNA的体外方法，其包括(a)用能够结合甲基化DNA的多肽包被容器；(b)将所述多肽与含有甲基化和/或未甲基化DNA的样品接触；和(c)检测所述多肽与甲基化DNA的结合。在优选实施方案中，所述方法还包括步骤(d)通过测序分析所检测的甲基化DNA。本发明的另一方面是用于根据本发明的方法检测甲基化DNA的试剂盒，其包含(a)能够结合甲基化DNA的多肽；(b)可以用所述多肽包被的容器；(c)包被所述容器的手段；和(d)检测甲基化DNA的手段。
用于检测甲基化 dna 试剂盒方法

[发明专利]一种检测EBV中C启动子甲基化水平的试剂盒及方法-CN202110519092.4有效
发明人：曹素梅;林冬丰;左志向;李雪琪;谢尚杭;陈志航 -专利权人：中山大学肿瘤防治中心（中山大学附属肿瘤医院、中山大学肿瘤研究所）
申请日： 2021-05-12 - 公布日： 2022-07-12 - 主分类号： C12Q1/6886 文献下载
摘要：本发明公开了一种检测EBV中C启动子甲基化水平的试剂盒和方法。本发明结合甲基化PCR技术中的MSP和MS‑HRM技术，开发了一种能进行实时荧光定量和定性检测的甲基化PCR(qMSP‑HRM)方法，并引入了甲基化定量阳性对照质粒及未甲基化定量阳性对照质粒。通过本发明所述qMSP‑HRM方法，既可以定量定性检测EBV C启动子的甲基化，也可定量定性其他基因的甲基化。
一种检测 ebv 启动子甲基化水平试剂盒方法

[发明专利]一种检测DNA主动去甲基化的方法-CN201110077002.7有效
发明人：马端;张进;王慧君;杨璐 -专利权人：复旦大学
申请日： 2011-03-29 - 公布日： 2012-10-10 - 主分类号： C12Q1/68 文献下载
摘要：本发明属生物技术领域，涉及一种基因诱导DNA去甲基化的检测方法。本发明利用筛选的已确定甲基化状态的细胞株为基础，收集基因与细胞株的混合克隆并测定其DNA甲基化的状态，对比未转基因的细胞株甲基化状态，得到检测结果。本发明还通过构建人工CpG岛报告基因载体PCBS-luc，体外使用甲基转移酶M.SssI对载体进行甲基化处理，并与anti-hygromycin基因表达载体共转HEK293细胞，使用潮酶素B筛选出完全甲基化、部分甲基化和非甲基化的PCBS稳定整合细胞株。本发明可用于观察目标蛋白去甲基化的功能、检测DNA甲基化或去甲基化的功能、观察组蛋白修饰与DNA甲基化之间的关系，还可用于研究环境因子对于细胞DNA甲基化的影响。
一种检测 dna 主动甲基化方法

[发明专利]DNA甲基化转化方法、试剂盒及应用-CN202211516489.9在审
发明人：胡立夫;南熠郎 -专利权人：深圳市人民医院;胡立夫
申请日： 2022-11-30 - 公布日： 2023-03-14 - 主分类号： C12Q1/6806 文献下载
摘要：本发明属于生物技术领域，公开了DNA甲基化转化方法、试剂盒及应用。DNA甲基化转化方法：将DNA和甲基化转化试剂反应，甲基化转化试剂将DNA中未甲基化的胞嘧啶脱氨基转化为尿嘧啶，得甲基化转化DNA；甲基化转化试剂包括焦亚硫酸盐、亚硫酸氢盐中的至少一种，以及氢氧化钠。试剂盒包括甲基化转化试剂、DNA保护剂和脱硫剂。本发明的甲基化转化试剂优化了转化方法包括氢氧化钠，可将DNA双链打开，便于进行甲基化转化，缩短了转化时间，降低了DNA的降解，提高转化效率。上述转化方法或试剂盒可用于制备待检样品的甲基化标志物，以检测相关疾病。
dna 甲基化转化方法试剂盒应用

[发明专利]用于人RASSF1A基因甲基化检测的特异性引物组、试剂盒及方法-CN202110795567.2在审
发明人：张佳幸;刘枭男;崔亚丽 -专利权人：西安金磁纳米生物技术有限公司
申请日： 2021-07-14 - 公布日： 2021-09-10 - 主分类号： C12Q1/6858 文献下载
摘要：本发明属于DNA甲基化检测领域，特别涉及一种用于人RASSF1A基因甲基化检测的特异性引物、试剂盒及方法。克服现有特定CpG位点的甲基化检测方法操作繁琐，检测仪器成本高的技术问题。引物组包括甲基化特异性引物对和未甲基化特异性引物对，对RASSF1A基因启动子区域特定CpG位点进行识别与扩增；在甲基化特异性引物对和未甲基化特异性引物对中正向引物的5'端均标记地高辛，反向引物的5'端均标记生物素通过优化引物在保证准确性、操作简便性的同时提高了速度和灵敏度，0.1％的靶点变异可在90分钟内区分，较之前DNA甲基化试纸条检测方法显著提高了速度和灵敏度。且检测过程中仅通过试纸条目视化判读结果，极大地降低了整个检测的成本。
用于 rassf1a 基因甲基化检测特异性引物试剂盒方法

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