本发明公开了一种日本血吸虫含EF-hand结构域钙结合蛋白(SjEFCAB)重组抗原蛋白的制备方法,包括设计SEQ ID NO.3或其互补链为5′引物,SEQ ID NO.4或其互补链为3′引物,进行日本血吸虫SjEFCAB基因序列的扩增;日本血吸虫SjEFCAB重组质粒的构建和鉴定;重组蛋白的诱导表达和纯化等步骤。此外,本发明还公开了采用上述方法制得的日本血吸虫SjEFCAB重组抗原蛋白在制备检测日本血吸虫病患者血清抗体的产品中的应用。经过酶联免疫吸附试验(ELISA)的验证,本发明的日本血吸虫SjEFCAB重组抗原蛋白用于日本血吸虫病的诊断具有较高的敏感性和特异性,是潜在的诊断候选靶标,可以作为日本血吸虫病诊断的目的抗原。
本发明提供了一种检测日本毛刺线虫的引物组,所述引物组包括上游引物TjF和下游引物TjR,序列分别如SEQ ID NO.1和SEQ ID NO.2所示;以及上述引物组在检测日本毛刺线虫方面和在鉴定区分日本毛刺线虫和雪松毛刺线虫方面的应用本发明提供的引物组可以特异性检测日本毛刺线虫,可应用于鉴定区分日本毛刺线虫与雪松毛刺线虫,特异性更好,不需要测序,可实现快速鉴定。而且,该引物组的PCR扩增片段大小为400bp,灵敏度高,容易扩增,对于日本毛刺线虫的检测以及日本毛刺线虫和雪松毛刺线虫的鉴定区分方面,具有很好的推广应用前景。
本发明公开了一种日本血吸虫重组抗原,该重组抗原是由包含日本血吸虫MRP1基因片段的重组载体经表达而制得,所述MRP1基因片段的序列为编码SEQ ID NO.1所示氨基酸序列的核苷酸序列。本发明还公开了上述日本血吸虫重组抗原在制备诊断日本血吸虫病的产品中的应用。本发明的日本血吸虫重组抗原rSjMRP1,用于诊断日本血吸虫病,敏感性高、特异性强,对于血吸虫病防治具有重要意义。
本发明公开了一种日本血吸虫免疫表位重组蛋白,该重组蛋白为SEQ ID NO.1所示的表位肽68、SEQ ID NO.2所示的表位肽71或SEQ ID NO.3所示的串联表位肽。本发明还公开了前述日本血吸虫免疫表位重组蛋白在制备诊断日本血吸虫的产品中的应用。本发明的日本血吸虫免疫表位重组蛋白能有效、快速地检测日本血吸虫感染,并在日本血吸虫的早期感染检出中具有较好的灵敏度。