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[发明专利]一种规模化获得十字花科作物小孢子植株的方法-CN200710065867.5无效
发明人：王敬乔;陈苇;刘丽;董云松;李根泽 -专利权人：云南省农业科学院经济作物研究所
申请日： 2007-05-11 - 公布日： 2007-10-10 - 主分类号： A01H1/00 文献下载
摘要：本发明涉及一种规模化获得十字花科作物小孢子植株的方法，其特征在于：使小孢子培养胚充分成熟，同时在非无菌条件下进行小孢子胚的萌发与再生，从而获得小孢子培养植株。该方法包括以下内容、步骤及结果：(1)小孢子的分离；(2)小孢子的培养；(3)小孢子幼胚的成熟培养；(4)小孢子成熟胚的萌发与再生方法；(5)成熟胚的再生频率为20％至100％。
一种规模化获得十字花科作物孢子植株方法

[发明专利]一种提高萝卜游离小孢子培养成胚率的方法-CN200710118650.6无效
发明人：张丽;付传翠;白小娟 -专利权人：北京市农林科学院
申请日： 2007-07-11 - 公布日： 2009-01-14 - 主分类号： C12N5/04 文献下载
摘要：本发明公开了一种提高萝卜游离小孢子培养成胚率的方法，属于植物育种技术领域。该方法包括如下步骤：(1)灭菌；(2)花药预处理；(3)分离小孢子；(4)小孢子培养。发明的优点是：本方法在进行萝卜小孢子培养之前，将花药离体，并在合适的培养基上进行低温预处理，这种预处理对萝卜小孢子培养产生两方面的影响：①使未成胚的萝卜品种产生了胚状体；②使成胚萝卜品种的成胚率有所提高，从16.0个/10⁵个小孢子提高到40.0个/10⁵个小孢子，提高了2.5倍。利用该方法进行中国萝卜游离小孢子培养，可获得较高的频率的胚状体，解决了中国萝卜游离小孢子培养胚状体再生的难题。
一种提高萝卜游离孢子培养成胚率方法

[发明专利]一种获得宝塔花椰菜小孢子DH再生植株的方法-CN201910740673.3在审
发明人：盛小光;顾宏辉;虞慧芳;王建升;赵振卿;沈钰森 -专利权人：浙江省农业科学院
申请日： 2019-08-12 - 公布日： 2019-10-08 - 主分类号： A01H4/00 文献下载
摘要：本发明公开了一种获得宝塔花椰菜小孢子DH再生植株的方法，供体宝塔花椰菜植株经过割球疏枝精心管理，促进花蕾良好发育，挑选适宜花蕾，分离小孢子，培养游离小孢子至子叶形胚状体形成，将子叶形胚状体插入胚状体分化培养基中，至胚状体膨大并再生出新植株，再生植株插于生根培养基中进行培养，将生根后的再生植株移入基质中，成活后进行小孢子再生植株倍性检测，获得宝塔花椰菜小孢子双单倍体DH(doubled haploid)再生植株本发明方法获得纯合的宝塔花椰菜小孢子DH再生植株，小孢子培养出胚率最高可达20个胚/蕾，胚状体的萌发率平均达50％。
再生植株小孢子宝塔花椰菜胚状体子叶形胚状体花蕾分化培养基花椰菜植株生根培养基小孢子培养游离小孢子倍性检测双单倍体植株萌发率纯合供体基质胚率膨大疏枝移入成活生根发育再生管理

[发明专利]一种获得橙色花椰菜小孢子DH再生植株的方法-CN201910741451.3在审
发明人：盛小光;顾宏辉;虞慧芳;王建升;赵振卿;沈钰森 -专利权人：浙江省农业科学院
申请日： 2019-08-12 - 公布日： 2019-10-18 - 主分类号： A01H4/00 文献下载
摘要：本发明公开了一种获得橙色花椰菜小孢子DH再生植株的方法，将橙色花椰菜种质资源与普通白色花椰菜材料杂交的F₁代作为供体材料，选择处于双核早期的花蕾，分离小孢子，培养游离小孢子至子叶胚状体形成，将子叶胚状体插入胚状体分化培养基中，至胚状体膨大并再生出新植株，再生植株插于生根培养基中进行培养，将生根后的再生植株移入基质中，成活后进行小孢子再生植株倍性检测和花球鉴别，获得橙色花椰菜小孢子双单倍体本发明方法获得纯合的橙色花椰菜小孢子DH再生植株，小孢子培养出胚率最高可达35个胚/蕾，胚状体的萌发率平均达45％。
再生植株小孢子橙色花椰菜胚状体子叶胚状体白色花椰菜分化培养基生根培养基小孢子培养游离小孢子倍性检测供体材料双单倍体种质资源花蕾植株萌发率纯合花球基质胚率膨大双核移入成活鉴别生根杂交再生

[发明专利]一种萝卜游离小孢子的培养方法-CN200310115112.3无效
发明人：张丽 -专利权人：北京市农林科学院
申请日： 2003-11-21 - 公布日： 2004-11-10 - 主分类号： A01H4/00 文献下载
摘要：本发明公开了一种萝卜游离小孢子的培养方法。通过采用低温预处理及震荡培养方式，提高了萝卜小孢子培养的成胚率，使得成胚率提高到16.0个/10⁵个小孢子，并在中国萝卜中获得了再生株。利用该方法进行中国萝卜游离小孢子培养，可获得较高的频率的胚状体，解决了中国萝卜游离小孢子培养胚状体再生的难题。
一种萝卜游离孢子培养方法

[发明专利]一种提高结球甘蓝低出胚基因型小孢子胚胎率发生的方法-CN201711462427.3在审
发明人：王神云;戴忠良;李建斌;王红;于利;余方伟;唐君;秦文斌;山溪 -专利权人：江苏省农业科学院
申请日： 2017-12-28 - 公布日： 2018-06-15 - 主分类号： A01H4/00 文献下载
摘要：本发明公开了一种提高结球甘蓝低出胚基因型小孢子胚胎发生率的方法,将芥菜、小白菜无菌花药与结球甘蓝小孢子混合悬浮液共同培养,培养得到的胚状体在初期即可确定是结球甘蓝的胚状体,因为结球甘蓝小孢子是游离状态的,而芥菜、小白菜小孢子在花药中,因此在再生植株移栽时不需要对小孢子植株群体的芥菜、小白菜植株进行区别鉴定,从而减少了工作量,从而提高结球甘蓝低出胚基因型小孢子出胚效率。
结球甘蓝小孢子小白菜芥菜基因型胚状体花药混合悬浮液胚胎发生率小孢子植株无菌花药游离状态再生植株植株移栽工作量胚胎群体

[发明专利]小孢子成熟胚直接萌发成植株的制备方法-CN02147892.9无效
发明人：孙蒙祥;田辉 -专利权人：武汉大学
申请日： 2002-12-20 - 公布日： 2003-06-04 - 主分类号： A01H4/00 文献下载
摘要：本发明公开了一种小孢子成熟胚直接萌发成植株的制备方法，首先是小孢子的制备，选取小孢子的新鲜花蕾，消毒，无菌水洗去消毒液，在培养基中挤压花蕾，过筛、离心收集小孢子；其次是小孢子胚的诱导，用培养基调小孢子密度，恒温培养；第三是小孢子胚的萌发，将根和子叶及一定长度的已分化完全的胚的根插入固体培养基中，光照培养一定时间后形成植株。
孢子成熟直接萌发植株制备方法

[发明专利]一种促进羽衣甘蓝顽固基因型小孢子胚胎发生的方法-CN201310338479.5有效
发明人：张振超;戴忠良;潘跃平;毛忠良;姚悦梅;秦文斌;潘永飞;肖燕;吴国平;孙春青;马志虎 -专利权人：镇江瑞繁农艺有限公司
申请日： 2013-08-06 - 公布日： 2013-11-20 - 主分类号： A01H4/00 文献下载
摘要：本发明公开了一种促进羽衣甘蓝顽固基因型小孢子胚胎发生的方法，将油菜无菌花药与羽衣甘蓝小孢子混合悬浮液共同培养，培养得到的胚状体在初期即可确定是羽衣甘蓝的胚状体，因为羽衣甘蓝小孢子是游离状态的，而油菜小孢子在花药中，因此在再生植株移栽时不需要对小孢子植株群体的油菜植株进行区别鉴定，从而减少了工作量，从而提高羽衣甘蓝顽固基因型小孢子出胚效率。
一种促进羽衣甘蓝顽固基因型孢子胚胎发生方法

[发明专利]一种适用于多种基因型小麦小孢子培养的方法-CN201510419370.3有效
发明人：夏兰琴;杜文明;孙永伟 -专利权人：中国农业科学院作物科学研究所
申请日： 2015-07-16 - 公布日： 2018-08-07 - 主分类号： A01H4/00 文献下载
摘要：本发明公开了一种适用于多种基因型小麦小孢子培养的方法。本发明所提供的培养小麦小孢子获得再生植株的方法，包括：(1)将待培养小麦的小孢子接种于胚状体诱导培养基，进行诱导培养，得到小孢子胚状体；(2)将所述小孢子胚状体接种于再生培养基，进行再生培养，得到再生苗该方法适用于多种基因型小麦品种，并且该方法的胚状体诱导率、植株再生率、绿苗率、自然加倍率显著高于传统的常规小孢子培养方法。
一种适用于多种基因型小麦孢子培养方法

[发明专利]一种提高菜心游离小孢子培养胚状体出胚数的方法-CN201911212546.2在审
发明人：庞强强;周曼;蔡兴来;孙晓东;张文 -专利权人：海南省农业科学院蔬菜研究所
申请日： 2019-12-02 - 公布日： 2020-01-31 - 主分类号： A01H4/00 文献下载
摘要：本发明提供一种提高菜心游离小孢子胚状体出胚数的培养方法，第一步选取处于单核靠边期的菜心花蕾，消毒后分离纯化出游离小孢子，将纯化后的小孢子悬浮于NLN液体培养基中，用血球计数板将小孢子密度调整为1×10
小孢子游离小孢子恒温培养箱胚状体单倍体育种培养皿小孢子悬浮液单核靠边期活性炭促进作用大量元素分离纯化密度调整热激处理培养基花蕾暗培养计数板分装制备悬浮诱导消毒转入应用

[发明专利]一种提高难出胚大白菜胚诱导率的培养基及其方法-CN202211371891.2在审
发明人：张红;王超楠;黄志银;范伟强;张斌;刘晓晖 -专利权人：天津科润农业科技股份有限公司
申请日： 2022-11-03 - 公布日： 2023-01-31 - 主分类号： A01H4/00 文献下载
摘要：本发明涉及植物组织培养技术领域，尤其涉及一种提高难出胚大白菜胚胚诱导率的培养基及其方法。其中本发明的培养基为向1/2NLN培养基中添加浓度为0.05‑2.0mg/L的灰黄霉素。本方案首次提出向培养基内添加抗生素灰黄霉素用以提高供试白菜小孢子胚胚诱导率的方法，该方法不仅可以显著地提高难出胚白菜材料的出胚率，在一定程度上打破基因型对小孢子胚诱导的限制，还可降低小孢子培养过程中的污染率，有助于建立白菜小孢子高效培养体系，加快白菜种质创新及育种进程。
一种提高难出胚大白菜诱导培养基及其方法

[发明专利]一种萝卜小孢子培养方法-CN202111104209.9在审
发明人：苏小俊;刘晓宏;柳李旺;雍明丽;王绮皎;刘哲;王燕;徐良;包崇来;梅时勇;张全杰 -专利权人：江苏省农业科学院
申请日： 2021-09-23 - 公布日： 2022-02-11 - 主分类号： A01H4/00 文献下载
摘要：本发明公开了一种萝卜小孢子培养方法，专用于提高萝卜游离小孢子胚胎发生率的方法，具体方法为：(1)根据最低气温的差异选取适宜大小的花蕾，将选取的花蕾置于4℃下预处理8～10h，接着置于6℃下预处理12～14h；(2)花蕾消毒后加入pH5.8的B5提取液中进行提纯，获得提纯后的小孢子；(3)将提纯后的小孢子悬浮在pH5.8的1/2NLN‑13(添加0.25mg/L 6‑BA)培养基中，32.5℃下热激处理6～8h后，室温下静置暗培养，得到肉眼可见的胚状体；(4)将胚状体振荡培养，获得子叶型胚。本发明将满身红萝卜和穿心红萝卜小孢子胚胎平均发生率由8胚/蕾和3胚/蕾分别提高到15胚/蕾和8胚/蕾。本发明解决了现有技术存在的问题。
一种萝卜孢子培养方法

[发明专利]一种提高乌菜游离小孢子出胚率及胚性培养物增殖的方法-CN202310814612.3在审
发明人：汪承刚;何云;袁凌云;唐小燕;陈国户;侯金锋;王文杰;吴建强;黄兴学;黄硕伟;张珮玉 -专利权人：安徽农业大学;安徽省皖江蔬菜产业技术研究院有限责任公司
申请日： 2023-07-03 - 公布日： 2023-09-15 - 主分类号： A01H4/00 文献下载
摘要：本发明提供了一种提高乌菜游离小孢子出胚率的方法，方法如下：(1)挑选处于单核靠边期的乌菜花蕾，并预处理、消毒；(2)研磨花蕾，将研磨液过滤至烧杯中并离心，得纯合小孢子；(3)向NLN培养基中加入2.5～10mg/L 5‑氮胞苷，用其重悬纯化小孢子；(4)对所得产物热激后转入暗培养；待出现肉眼可见的胚状体后，转移到摇床上培养。本发明还提供了一种提高乌菜胚性培养物增殖的方法。本发明的优点在于：本发明在乌菜小孢子胚培养过程中，通过添加5‑氮胞苷于NLN培养基上，可以显著提高乌菜游离小孢子出胚率；同时，通过将胚状体转移至添加有5‑氮胞苷的MS固体培养基上，进一步提高乌菜胚性培养物的增殖率
一种提高游离孢子出胚率培养增殖方法

[发明专利]一种提高新疆芜菁游离小孢子培养胚状体诱导率的方法-CN201710012630.4在审
发明人：轩正英;马国财;谭占明;张娟;王丽君 -专利权人：塔里木大学
申请日： 2017-01-09 - 公布日： 2017-05-24 - 主分类号： A01H4/00 文献下载
摘要：一种新疆芜菁游离小孢子培养胚状体的方法，包括选择适当长度的芜菁花蕾，并进行预处理；消毒后收集花蕾的小孢子；在诱导培养基热激处理后，暗培养至形成胚状体。本发明对新疆芜菁小孢子培养采取的方法实用、步骤具体、适用的基因型广泛、重复性好，可实现新疆芜菁游离小孢子培养获得单倍体技术在创建DH群体上的广泛应用。利用该方法获得的胚状体及再生植株，突破了目前芜菁小孢子胚诱导体系建立困难现状。本发明创建的DH群体可广泛应用于芜菁的分子标记、基因图谱构建和自交系的选育等遗传和育种工作中。
一种提高新疆芜菁游离孢子培养胚状体诱导方法

[发明专利]一种辣椒游离小孢子细胞团培养方法-CN200410086701.8无效
发明人：刘凡;赵泓;陈彬;耿三省;张月云 -专利权人：北京市农林科学院
申请日： 2004-10-28 - 公布日： 2006-05-10 - 主分类号： C12N5/04 文献下载
摘要：本发明公开了一种辣椒游离小孢子细胞团培养方法。该方法先对花药进行预培养，然后进行小孢子的游离培养。本发明在辣椒的游离小孢子培养体系上另辟蹊径，通过游离培养经预培养后的花药中的小孢子细胞及细胞团，获得了胚状体及其植株，显微镜检提供了胚状体的单细胞、单倍体发育途径的细胞学证据。该技术体系的建立，不仅是辣椒单倍体育种技术上的突破，而且该游离小孢子培养胚状体诱导体系还可能成为进行植物细胞分化、发育研究的良好实验体系。
一种辣椒游离孢子细胞培养方法

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