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[发明专利]一种基于CRISPR/Cas9系统的萝卜基因编辑技术及其应用-CN202211523455.2在审
发明人： 柳李旺;应佳丽;王燕;徐良;马银波;王沦;姚数琦 -专利权人：南京农业大学
申请日： 2022-11-30 - 公布日： 2023-10-24 - 主分类号： C12N15/82 文献下载
摘要：本发明公开了一种基于CRISPR/Cas9系统的萝卜基因编辑技术及其应用，首次在萝卜‘NAU‑067’中通过根癌农杆菌介导的遗传转化实现萝卜RsPDS基因编辑。将培养4～5d无菌苗切取带柄子叶后置于MS固体培养基上预培养3d，根癌农杆菌侵染萝卜带柄子叶后在MS固体培养基上共培养3d，之后置于MS+0.75mg/L TDZ+0.35mg/L NAA+300mg/L Carb的固体培养基上诱导不定芽。以RsPDS基因为例，出芽后采用GUS染色初步分析是否为转基因阳性愈伤组织，采用改良CTAB法提取白化苗DNA，PCR扩增发现1株新叶全白化苗在靶位点2存在3个碱基缺失和单个碱基替换，1株白化嵌合株在靶位点1存在3个碱基插入和单个碱基替换。本发明建立起一种基于CRISPR/Cas9系统的萝卜功能基因编辑技术体系，为创制突变体、高效验证基因的生物学功能以及创制萝卜优异种质提供了重要技术支撑。
一种基于 crispr cas9 系统萝卜基因编辑技术及其应用

[发明专利]一种发根农杆菌介导的萝卜功能基因编辑方法及其应用-CN202211408928.4在审
发明人： 柳李旺;应佳丽;王燕;徐良;王爽;谢洋;沈峰 -专利权人：南京农业大学
申请日： 2022-11-10 - 公布日： 2023-10-24 - 主分类号： C12N15/82 文献下载
摘要：本发明公开了一种发根农杆菌介导的萝卜功能基因编辑方法及其应用，首次在‘NAU‑LHZ’萝卜中通过发根农杆菌介导的遗传转化实现萝卜功能基因编辑。发根农杆菌侵染无根幼苗后，在MS固体培养基上共培养3d后，置于MS+300mg/L Carb的固体培养基上培养不定根。以RsGLK2.1基因为例，1株发根农杆菌诱导的不定根在靶位点2中成功被编辑，将成功编辑的不定根置于MS+0.75mg/L TDZ+0.35mg/L NAA+300mg/L Carb的固体培养基中诱导愈伤组织，通过愈伤组织表型分析进一步证实其成功编辑。本发明可快速验证萝卜关键候选基因的生物学功能，极大地加快萝卜优异种质创新与新品种选育进程。
一种发根杆菌萝卜功能基因编辑方法及其应用

[发明专利]一种快速获得萝卜转基因材料的方法-CN202210536365.0有效
发明人：王燕;王爽;易小芳;应佳丽;董俊辉;柳李旺;徐良 -专利权人：南京农业大学
申请日： 2022-05-20 - 公布日： 2023-10-24 - 主分类号： C12N15/82 文献下载
摘要：本发明涉及一种快速获得萝卜转基因材料的方法，包括：对萝卜种子进行消毒种植无菌苗；活化携带目的基因的发根农杆菌；制备侵染液；获取无根苗外植体并浸入菌液进行侵染；经过共培养和脱菌培养30d后，通过表型筛选、PCR检测和qRT‑PCR分析鉴定阳性毛状根；切取阳性毛状根放置于愈伤组织培养基上诱导愈伤组织，获得转基因愈伤组织。本发明提高了发根农杆菌诱导萝卜毛状根的效率，缩短了发根时间，成功诱导了转基因愈伤组织，能够进行萝卜部分本体基因功能验证。
一种快速获得萝卜转基因材料方法

[发明专利]一种基于非组培、快速验证萝卜盐胁迫响应基因功能的方法-CN202211442705.X在审
发明人：王燕;易小芳;王爽;秦跳姣;柳李旺;徐良;梅燚 -专利权人：南京农业大学
申请日： 2022-11-17 - 公布日： 2023-09-22 - 主分类号： C12Q1/6895 文献下载
摘要：本发明涉及一种基于非组培、快速验证萝卜盐胁迫响应基因功能的方法，包括：对萝卜种子进行催芽播种；活化携带目的基因的发根农杆菌；制备侵染液；在非组培条件下切除实生根，获得无根苗并浸入侵染液进行侵染；侵染后的无根苗移栽至营养土并诱导毛状根；通过表型筛选和PCR检测鉴定阳性复合植株；对复合植株进行盐处理，通过表型和超氧阴离子自由基含量(O2‑)测定来评价阳性复合植株的耐盐性。本发明不仅提高了发根农杆菌诱导萝卜毛状根的效率，缩短发根时间，而且避免了无菌操作。成功验证了萝卜盐胁迫响应基因的功能，为萝卜本体基因功能验证提供技术参考。
一种基于非组培快速验证萝卜胁迫响应基因功能方法

[发明专利]一种利用壁蜂进行萝卜制种的方法及装置-CN202111288314.2有效
发明人：刘哲;梅燚;沈峰;郑佳秋;柳李旺;张丽娜;冯汝超;吴永成;祖艳侠;王薇薇;苏小俊;陆岱鹏 -专利权人：江苏沿海地区农业科学研究所
申请日： 2021-11-02 - 公布日： 2023-06-27 - 主分类号： A01G22/25 文献下载
摘要：本发明公开了一种利用壁蜂进行萝卜制种的方法及装置，本发明涉及蔬菜栽培技术领，域制种方法包括如下步骤：步骤一、搭建育种设施；步骤二、在网室内种植萝卜种株，并将设有自动补水泥浆盘的蜂巢箱置于网室内部上方；步骤三、萝卜种株与壁蜂的管理；步骤四、壁蜂回收与保存；步骤五、种子收获；一种利用壁蜂进行萝卜制种的装置，包括大棚、设置在大棚内的网室及基于PLC的环境自动控制系统，所述网室内部挂设有自动补水泥浆盘的蜂巢箱；本发明利用环境自动控制系统和新型蜂巢箱配合壁蜂辅助授粉的方式进行萝卜育种，从而降低天气因素对繁种的不利影响，提高壁蜂授粉效率，达到显著提高萝卜种子产量和质量的目的。
一种利用进行萝卜制种方法装置

[发明专利]一种设施芦笋秸秆快速转化利用的方法-CN202211409011.6在审
发明人： 柳李旺;赵福素;徐良;王燕;崔峰;刘宝阳 -专利权人：南京农业大学
申请日： 2022-11-10 - 公布日： 2023-03-07 - 主分类号： A01G18/00 文献下载
摘要：本发明属于现代农业蔬菜生产领域，公开了一种设施芦笋秸秆快速转化利用的方法，具体涉及一种利用芦笋秸秆作为栽培主料在设施芦笋园内间套作大球盖菇的方法。该方法主要包括以下步骤：芦笋母茎转换与清园、栽培料预处理、整地作畦、大球盖菇菌种播种、菌丝生长期管理、出菇期管理、病虫害防治、大球盖菇与芦笋采收、菌渣还田栽培芦笋。本发明充分利用芦笋秸秆、设施芦笋园冬闲土地与空间，及设施设备资源进行间套作大球盖菇，能够提高大球盖菇中黄酮类化合物、维生素C等抗氧化活性物质的含量、降低设施芦笋栽培过程中化肥施用量，解决资源浪费和秸秆焚烧带来的环境污染问题，有效提高农产品附加值，推动芦笋产业与绿色生态循环农业可持续发展。
一种设施芦笋秸秆快速转化利用方法

[发明专利]一种卡巴尼氏致病杆菌NN7及其应用-CN202110891500.9有效
发明人：张克云;王浩;柳李旺;李瑞;窦振国;包浩然;林建;任润生;赵鸿阳;阿德勒·迪尔曼 -专利权人：南京农业大学
申请日： 2021-08-04 - 公布日： 2023-03-03 - 主分类号： C12N1/20 文献下载
摘要：本发明公开了一种卡巴尼氏致病杆菌NN7，其保藏编号为CCTCC NO：M 2021760，于2021年6月24日保藏于中国典型培养物保藏中心。本发明还公开了卡巴尼氏致病杆菌（Xenorhabdus cabaniltasii）NN7菌株在制备生防菌剂中的应用。本发明中卡巴尼氏致病杆菌NN7菌株对尖孢镰刀菌西瓜专化型1号生理小种的抑制能力显著强于伯氏致病杆菌NN6菌株，在西瓜枯萎病的防治方面具有更优异的开发潜力。
一种巴尼致病杆菌 nn7 及其应用

[发明专利]一种具有玉米粒净化功能的剥皮脱粒机构及其净化方法-CN202111417956.8有效
发明人：刘勇;张小敏;柳李旺;黄凯;李杰 -专利权人：镇江富华农业科技有限公司
申请日： 2021-11-25 - 公布日： 2023-02-17 - 主分类号： A01F11/06 文献下载
摘要：本发明涉及农业机械技术领域，具体为一种具有玉米粒净化功能的剥皮脱粒机构及其净化方法，包括传送粉碎结构，传送粉碎结构的下方设置有粉碎结构，粉碎结构的下方连接有净化结构，传送粉碎结构包括第一驱动齿和从动辊以及传动粉碎皮带，碎结构包括第二驱动齿以及粉碎辊，净化结构的上设置有第一电机，第一电机的输出端连接有传送辊。本发明相对运动的粉碎辊以及传动粉碎皮带可以对玉米进行脱粒，脱粒后的玉米粒通过粉碎辊之间的间隙进行回收，玉米穗轴从玉米穗轴回收板上滑出，并进行新一轮的脱粒工作，玉米粒在净化结构的内部进一步的除杂和除须，与传统的结构不同，使用方便，便于回收玉米和玉米穗轴，脱粒效率大大提高。
一种具有玉米净化功能剥皮脱粒机构及其方法

[发明专利]一种提高萝卜小孢子胚胎发生率的方法-CN202111103504.2在审
发明人：苏小俊;雍明丽;徐良;刘晓宏;王绮皎;刘哲;王燕;柳李旺;张秋萍;包崇来;梅时勇;张全杰 -专利权人：江苏省农业科学院
申请日： 2021-09-23 - 公布日： 2022-11-11 - 主分类号： A01H4/00 文献下载
摘要：本发明公开了一种提高萝卜小孢子胚胎发生率的方法，专用于提高迟钝基因型萝卜游离小孢子胚胎发生率的方法，具体方法为：(1)活跃基因型萝卜花蕾个数：迟钝基因型萝卜花蕾个数＝1：2，将选取的花蕾置于4℃下预处理10～12h，接着置于6℃下预处理8～10h；(2)消毒后的花蕾加入pH5.8的B5提取液中进行提纯，获得提纯后的小孢子；(3)将提纯后的小孢子悬浮在pH5.8的1/2NLN‑13(添加0.30mg/L 6‑BA)培养基中，32.5℃下热激处理6～8h后，室温下静置暗培养，得到肉眼可见的胚状体；(4)将胚状体振荡培养，获得子叶型胚。本发明明显提高了迟钝基因型圆白萝卜小孢子胚胎发生率由0增加到5胚/蕾，本发明解决了现有技术存在的问题。
一种提高萝卜孢子胚胎发生率方法

[实用新型]一种可拼接组合式蜂巢箱-CN202221589108.5有效
发明人：梅燚;刘哲;郑佳秋;沈峰;祖艳侠;柳李旺;吴永成;王薇薇;张丽娜;冯汝超;苏小俊;陆岱鹏;王鹭洁 -专利权人：江苏沿海地区农业科学研究所
申请日： 2022-06-24 - 公布日： 2022-11-08 - 主分类号： A01K47/00 文献下载
摘要：本实用新型公开了一种可拼接组合式蜂巢箱，包括支撑箱一、支撑箱二、组合箱一和组合箱二，所述支撑箱一右侧固定连接有支撑箱二，位于所述支撑箱一顶端设置有长方形的拼接板一且通过螺栓相连接，所述拼接板一中端设置有梯形形状凹槽一，所述凹槽一内壁插入连接有凸板一，所述凸板一顶端通过螺栓连接有组合箱一，位于所述支撑箱二顶端设置有长方形的拼接板二且通过螺栓相连接，所述拼接板二中端设置有梯形形状的凹槽二，所述凹槽二内壁插入连接有凸板二，所述凸板二顶端通过螺栓连接有组合箱二，涉及蜂巢箱技术领域，通过拼装组合提升了蜂巢箱放置稳定性，提高了蜂巢箱的二次扩张时的拼接组合能力。
一种拼接组合式蜂巢

[实用新型]一种便于快速拆装的壁蜂箱-CN202221492925.9有效
发明人：刘哲;梅燚;郑佳秋;沈峰;祖艳侠;柳李旺;吴永成;王薇薇;张丽娜;冯汝超;苏小俊;陆岱鹏;张向向 -专利权人：江苏沿海地区农业科学研究所
申请日： 2022-06-15 - 公布日： 2022-11-04 - 主分类号： A01K67/033 文献下载
摘要：本实用新型公开了一种便于快速拆装的壁蜂箱，包括壁蜂箱底板、第一挡板、第二挡板和盖板，所述第一挡板通过合页连接于所述壁蜂箱底板的上端前后部，所述第二挡板通过合页连接于所述壁蜂箱底板的上端两侧，所述第一挡板的上端两侧均开设有定位孔，所述定位孔的外侧端固定设有磁吸环，所述盖板设于第一挡板和第二挡板的上端，所述盖板的前后端两侧贯穿连接有定位插杆，所述定位插杆的外端焊接有金属板，所述金属板的外端焊接有拉环。该便于快速拆装的壁蜂箱，便于快速转动拆装，结构简单，成本低，并且便于直接手动插接固定，方便安全搬运转移，稳定可靠，密封性能较高，防止壁蜂飞出，高效透气，达到了安全阻隔的效果，整体提拉携带较为方便。
一种便于快速拆装蜂箱

[发明专利]一种农用拖拉机驱动的玉米秸秆粉碎装置及其工作方法-CN202110970934.8有效
发明人： 柳李旺;张小敏;黄凯;刘勇;李杰 -专利权人：镇江富华农业科技有限公司
申请日： 2021-08-23 - 公布日： 2022-10-14 - 主分类号： A01D41/04 文献下载
摘要：本发明涉及农业机械技术领域，具体为一种农用拖拉机驱动的玉米秸秆粉碎装置及其工作方法，包括农用拖拉机以及粉碎箱，粉碎箱的底部固定设置有秸秆排料筒，粉碎箱包括：脱粒仓、秸秆粉碎仓、以及秸秆切割仓，秸秆切割仓的内部滑动设置有传动块，传动块的内部转动设置有异形齿轮，农用拖拉机上的拖拉机驱动轮与第一皮带轮转动连接，蜗轮上转动连接有辅助齿轮，辅助齿轮上的辅助皮带轮与异形齿轮转动连接。本发明拖拉机驱动轮带动整个粉碎箱的作业，在对玉米秸秆进行粉碎的过程中，粉碎的秸秆会被输送到农用拖拉机的底部，可以减少生成的粉尘扩散到空气中，进而可以减少身体受到的伤害，同时方便对粉碎的秸秆进行收集。
一种农用拖拉机驱动玉米秸秆粉碎装置及其工作方法

[发明专利]一种高效繁殖萝卜自交不亲和系的方法-CN202110928484.6有效
发明人：王燕;王娟;倪萌;王琴;王爽;柳李旺;徐良 -专利权人：南京农业大学
申请日： 2021-08-13 - 公布日： 2022-09-30 - 主分类号： A01H1/02 文献下载
摘要：本发明公开了一种高效繁殖萝卜自交不亲和系的方法，属于十字花科萝卜属作物育种技术领域。该方法包括以下步骤：在萝卜自交不亲和系盛花期，于上午9～11点将适宜浓度褪黑素溶液喷施于盛开的萝卜花柱头上，每隔1天喷施1次至盛花期结束，同时结合壁蜂授粉技术完成萝卜自交不亲和系的高效繁殖。本发明通过对萝卜花柱头喷施新型化学试剂褪黑素，显著提高萝卜自交不亲和系的繁殖效率；同时处理操作简便、成本低，能有效解决萝卜自交不亲和系亲本难以大面积繁殖问题，推动利用自交不和系进行萝卜F1代高效制种的应用，实用价值大且应用前景广阔。
一种高效繁殖萝卜亲和方法

[发明专利]一种萝卜根肿病抗性鉴定的方法-CN202010484886.7有效
发明人： 柳李旺;孟玥;徐良;王燕;张婉婷;张晓莉 -专利权人：南京农业大学;南京莱福佳农业科技有限公司
申请日： 2020-06-01 - 公布日： 2022-07-19 - 主分类号： C12Q1/6895 文献下载
摘要：本发明公开了一种萝卜根肿病抗性鉴定的方法。萝卜根肿病抗性功能标记RsNBS135C,由上游引物RsNBS135C‑F和下游引物RsNBS135C‑R扩增萝卜基因组DNA得到。该标记在萝卜基因组DNA中扩增所得的核苷酸序列于琼脂糖凝胶电泳后呈现特异性带型，能够快速、直接鉴定萝卜种质中目标抗性基因位点，有利于高效可靠地利用抗根肿病目标基因、加快根肿病抗性遗传改良进程。
一种萝卜根肿病抗性鉴定方法

[发明专利]抑制多种植物真菌病害的昆虫病原线虫共生菌菌株及应用-CN202010376156.5有效
发明人：张克云;张潘杰;包浩然;柳李旺;窦振国;王浩;肖振华;肖宇辉;柳王亮;林建;徐良;熊阳杰;高国富;阿德勒·迪曼 -专利权人：南京农业大学
申请日： 2020-05-06 - 公布日： 2022-04-29 - 主分类号： C12N1/20 文献下载
摘要：本发明公开了抑制多种植物真菌病害的昆虫病原线虫共生菌菌株及应用，该菌株为伯氏致病杆菌的高毒力菌株NN6，保藏编号：CCTCC NO:M 2020097，2020年4月29日保藏于中国典型培养物保藏中心。本发明伯氏致病杆菌NN6具有较强的抑制尖孢镰刀菌西瓜专化型和黄瓜专化型、禾谷镰刀菌、稻瘟菌、灰葡萄孢、辣椒疫霉菌丝生长的能力，且随着体积浓度的增加而增高，抑菌效果显著。该菌株还具有抑制镰刀菌属孢子萌发的作用，抑制效果显著。该菌具有培养条件要求低、持效期长、来源环保无毒性等特点，对于保护生态环境和提高农产品的附加值上具有重要意义，加上抗菌谱更广这个优势，使其具有很好的市场开发应用前景。
抑制多种植物真菌病害昆虫病原线虫共生菌株应用

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