本发明涉及一种邻苯二酚半乳糖苷的制备方法,包括如下步骤:(1)采用磷酸缓冲液配制乳糖浓度为0.1M~0.3M,邻苯二酚浓度为0.05M~0.2M,氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示的β-半乳糖苷酶添加量为2μg~10μg/mL的反应体系;(2)将反应体系反应后,煮沸终止反应,离心,取上清液;(3)将上清液,经分离、干燥后,制得邻苯二酚半乳糖苷。采用经过突变的β-半乳糖苷酶合成邻苯二酚半乳糖苷,产物与其原料邻苯二酚相比,含有半乳糖基,增加了水溶性和稳定性,该化合物自身可作为化学合成中间体用以衍生合成新的高附加值化合物。