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[发明专利]一种高纯度的微环DNA及其制备方法和应用-CN201410364761.5有效
发明人：侯小虎;何成宜;陈志英 -专利权人：深圳新诺微环生物科技有限公司
申请日： 2014-07-29 - 公布日： 2018-07-27 - 主分类号： C12N15/10 文献下载
摘要：本发明提供了一种高纯度的微环DNA及其制备方法和应用，所述制备方法包括：1)提供含有靶标序列的亲本质粒，所述亲本质粒具有特异性重组位点、骨架DNA的核苷酸序列和微环DNA的核苷酸序列；2)将所述亲本质粒转化到宿主细胞，经诱导后所述亲本质粒通过位点特异性重组作用产生微环DNA和含有靶标序列的骨架DNA；3)裂解宿主细胞，对质粒进行预纯化，得到混合质粒，所述混合质粒中包括微环DNA、含有靶标序列的亲本质粒和/或含有靶标序列的骨架DNA；4)采用三螺旋纯化法去除混合质粒中的含有靶标序列的亲本质粒和/或含有靶标序列的骨架DNA，得到高纯度的微环DNA。
靶标微环混合质粒高纯度制备方法和应用核苷酸序列宿主细胞位点特异性重组特异性重组作用产生三螺旋预纯化裂解位点去除制备诱导转化

[发明专利]快速构建多聚腺苷酸polyA质粒的方法及相应质粒-CN202310974073.X在审
发明人：钱莉春;姜伟;赵碧玉;吴昕;杨熹;黎建军;李定华 -专利权人：苏州左旋星生物科技有限公司
申请日： 2023-08-04 - 公布日： 2023-09-08 - 主分类号： C12N15/66 文献下载
摘要：本发明涉及快速构建多聚腺苷酸polyA质粒的方法及相应质粒。该方法包括构建质粒骨架pLevoB1，合成目的mRNA基因片段并添加酶切位点，将目的mRNA基因片段插入质粒骨架pLevoB1中，即得到多聚腺苷酸polyA质粒成品，用作目标mRNA的模板质粒DNA。本发明能稳定、高效地为目的mRNA基因片段添加多聚腺苷酸polyA序列，且提高了正确克隆比例，所得多聚腺苷酸polyA质粒成品可用作目标mRNA的模板质粒DNA；还能便捷地更换线性化位点或增加多聚腺苷酸
快速构建腺苷酸 polya 质粒方法相应

[发明专利]一种重组杆状病毒载体骨架质粒及其应用-CN200710168929.5无效
发明人：肖少波;方六荣;赵骞;江云波;潘永飞 -专利权人：华中农业大学
申请日： 2007-12-17 - 公布日： 2008-09-10 - 主分类号： C12N15/866 文献下载
摘要：本发明属于动物基因工程技术领域，具体涉及一种重组杆状病毒载体骨架质粒的构建及应用。本发明克隆得到一种重组杆状病毒转移载体骨架质粒pFB－G－SFV，该质粒保藏在中国典型培养物保藏中心(CCTCC)，保藏号为CCTCC NO：M207070。本发明还公开了质粒pFB－G－SFV在重组杆状病毒包装上的应用。
一种重组杆状病毒载体骨架质粒及其应用

[发明专利]复制型重组腺病毒HAdV-5载体系统及其应用-CN201810092715.2有效
发明人：鲁茁壮;刘红军;邹小辉 -专利权人：中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所;北京知光基因科技有限公司
申请日： 2018-01-30 - 公布日： 2021-02-02 - 主分类号： C12N15/861 文献下载
摘要：本发明提供一种复制型重组腺病毒HAdV‑5载体系统，其包括骨架质粒pKAd5、中间质粒pMDXE3YA和穿梭质粒pKNXE3M。将目的基因编码区克隆到穿梭质粒的多克隆位点，EcoRI酶切携带目的基因的穿梭质粒，用所得片段替换中间质粒的对应部位；再用NdeI酶切新构建的中间质粒，用所得片段替换骨架质粒的对应部位，可获得重组腺病毒质粒；PacI线性化的重组腺病毒质粒转染293细胞，能够制备由HAdV‑5主要晚期启动子(MLP)控制目的基因表达的重组HAdV‑5腺病毒。
复制重组病毒 hadv 载体系统及其应用

[发明专利]一种pCasRA质粒及其制备方法和应用-CN202310081742.0在审
发明人：熊文广;常依;曾振灵;万鹏;谢龙飞;张旭财 -专利权人：华南农业大学
申请日： 2023-01-17 - 公布日： 2023-06-13 - 主分类号： C12N15/74 文献下载
摘要：本发明公开了一种pCasRA质粒，所述pCasRA质粒的核苷酸信息如SEQ ID NO：1所示。所述pCasRA质粒以pCas9质粒作为载体骨架，在载体骨架上接入接合转移位点oriT、pRA0726质粒的复制子和头孢西丁抗性基因，并将pCas9质粒中的crRNA部分替换成Cas9蛋白基因(SEQ 本发明所述pCasRA质粒能够在大肠杆菌中通过接合转移到鸭疫里氏杆菌中，并且该pCasRA质粒能够在鸭疫里氏杆菌中稳定表达Cas9蛋白基因，进行基因组DNA编辑，实现基因敲除和/或单碱基突变。
一种 pcasra 质粒及其制备方法应用

[发明专利]基于mariner转座子构建自杀型质粒及耐药突变菌株的方法-CN201910282837.2有效
发明人：孙坚;李龚;何玉张;刁晓苑;于泳鑫;刘雅红;廖晓萍 -专利权人：华南农业大学
申请日： 2019-04-10 - 公布日： 2020-07-31 - 主分类号： C12N15/63 文献下载
摘要：本发明共公开了一种基于mariner转座子构建自杀型质粒及耐药突变菌株的方法。该自杀型质粒的构建包括如下步骤：以pCat‑marinerr质粒为模板进行PCR扩增，将获得的扩增产物作为质粒骨架；然后以pUC57‑tpm质粒为模板扩增tpm抗性基因，再将质粒骨架和tpm抗性基因进行同源重组，得到所述自杀型质粒。本发明中的耐药突变菌株是将自杀型质粒转化大肠杆菌WM3064感受态细胞，然后将获得菌株和目标菌株混合培养，再用含有亚碲酸盐的单药板、以及含有亚碲酸盐和原抗性筛选标记药物的双药板进行筛选，得到耐药突变菌株
基于 mariner 座子构建自杀质粒耐药突变菌株方法

[发明专利]高通量简化噬菌体基因组骨架的方法-CN202210212383.3有效
发明人：马迎飞;袁盛建 -专利权人：深圳先进技术研究院
申请日： 2022-03-04 - 公布日： 2023-02-21 - 主分类号： C12N15/70 文献下载
摘要：本申请涉及生命科学技术领域，提供了一种高通量简化噬菌体基因组骨架的方法。所述方法包括如下步骤：设计并合成噬菌体的CiPGr序列文库，将CiPGr序列文库与pTarget质粒骨架组装，形成CiPGr质粒文库；将CiPGr质粒进行转化后提取CiPGr质粒；将CiPGr质粒转化进入含有spCas9质粒的宿主细菌中，得到CiPGr质粒‑细菌文库；将野生型噬菌体和对应的CiPGr质粒‑细菌文库在培养基中培养，迭代培养，生成突变噬菌体库；对间隔一定转移次数后得到的突变噬菌体库进行测序，确认所述噬菌体中的所有可删除基因
通量简化噬菌体基因组骨架方法

[发明专利]复制缺陷型重组腺病毒Ad41载体系统及其应用-CN200810126855.3有效
发明人：鲁茁壮;屈建国;洪涛 -专利权人：中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所
申请日： 2008-07-01 - 公布日： 2010-01-06 - 主分类号： C12N15/861 文献下载
摘要：具体而言，本发明提供的载体系统包括1个骨架质粒、1个穿梭质粒和1个包装细胞系，其中所述骨架质粒含有缺失了腺病毒包装所需编码区的腺病毒Ad41基因组，所述穿梭质粒含有用于插入目的基因的多克隆位点以及用于与骨架质粒发生同源重组的腺病毒
复制缺陷重组病毒 ad41 载体系统及其应用

[发明专利]用随机序列标记质粒对DNA片段进行高通量两端测序的方法-CN201410116844.2有效
发明人：刘晓;徐志超;尉晓林;吴仲义;阮珏 -专利权人：清华大学
申请日： 2014-03-26 - 公布日： 2014-06-25 - 主分类号： C40B40/02 文献下载
摘要：本发明公开了一种用随机序列标记质粒对DNA片段进行高通量两端测序的方法。本发明还提供了一种用于对DNA片段进行高通量两端测序的质粒库，质粒库中每个质粒均由质粒骨架片段和自上游到下游依次由标记序列1、待测DNA插入位点序列和标记序列2组成的DNA片段连接而成；且质粒库中任两种质粒，所述标记序列1和所述标记序列2的组合彼此不同；且所述质粒骨架片段中不含有与所述待测DNA插入位点序列相同的序列。利用本发明所提供的质粒库构建的文库除了拥有传统文库的特点外，还可以使用高通量的测序法对其中的基因组DNA进行两端测序。本发明使得长片段DNA两端测序具有了快速、便宜且准确的特点。
随机序列标记质粒 dna 片段进行通量两端方法

[发明专利]禽4型腺病毒(FAdV-4)载体系统及其应用-CN201810233613.8有效
发明人：鲁茁壮;邹小辉;洪涛;朱亚露;赵阳 -专利权人：中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所;江苏省农业科学院
申请日： 2018-03-22 - 公布日： 2021-01-08 - 主分类号： C12N15/861 文献下载
摘要：本发明提供一种重组禽腺病毒FAdV‑4载体系统，包括骨架质粒pKFAV4、中间质粒pKFAV4AP和穿梭质粒pKFAV4APNM。将目的基因编码区克隆到穿梭质粒的多克隆位点，NheI酶切携带目的基因表达框的穿梭质粒，用所得片段替换中间质粒的对应部位；再用AvrII或PacI酶切携带目的基因的中间质粒，借助连接反应或DNA组装反应将所得片段替换骨架质粒的对应部位，可获得重组腺病毒质粒；PmeI线性化腺病毒质粒转染LMH细胞，能够制备由人巨细胞启动子(CMVp)控制目的基因表达的重组FAdV‑4腺病毒。
病毒 fadv 载体系统及其应用

[发明专利]一种闭合线性DNA制备方法-CN202310705124.9在审
发明人：喻明军;崔康乐;纪世春;何丽丽 -专利权人：通用生物（安徽）股份有限公司
申请日： 2023-06-14 - 公布日： 2023-09-12 - 主分类号： C12N15/70 文献下载
摘要：本发明制备方法包括如下步骤：S1：质粒构建：质粒为含有目的基因、质粒骨架的质粒，所述质粒骨架含有诱导型启动子、端粒酶序列，所述目的基因两端均有端粒酶识别位点；S2：诱导培养，得到闭合线状DNA分子混合物本发明公开的制备方法用于在大肠杆菌中通过诱导剂促使其表达端粒酶直接切割质粒，形成闭合线性DNA分子，可减少商业化酶的使用，大大节约成本，提高产量。
一种闭合线性 dna 制备方法

[发明专利]增加商业化转基因植物产生的DNA构建体和方法-CN200480015511.5有效
发明人： L·吉尔伯特森;E·克里格尔;W·张;X·叶 -专利权人：孟山都技术有限公司
申请日： 2004-04-09 - 公布日： 2006-07-26 - 主分类号： C12N15/82 文献下载
摘要：本发明将非致死负性选择标记基因整合到DNA质粒的载体骨架DNA中，用于转化植物细胞。这些转基因被设计为在含有DNA质粒载体骨架DNA的植物细胞中表达非致死基因产物。用这些DNA质粒转化植物细胞增加了商业化植物的产生。
增加商业化转基因植物产生 dna 构建方法

[发明专利]用于人体细胞重编程的重组仙台病毒的制备方法及其应用-CN201910393050.3有效
发明人：不公告发明人 -专利权人：深圳市瑞亚再生医学科技有限责任公司
申请日： 2019-05-13 - 公布日： 2021-05-11 - 主分类号： C12N15/86 文献下载
摘要：本发明提供了一种用于人体细胞重编程的重组仙台病毒的制备方法，包括：制备含有T7终止子、P基因、L基因、NP基因和IRES片段的三种辅助质粒，和含有T7启动子、锤头状酶序列、乙肝核酶序列、T7终止子的pUC57‑Simple质粒；将所述pUC57‑Simple质粒酶切后连接full‑2质粒酶切产物，得到仙台病毒主骨架质粒；提供BSR‑T7/5细胞，使用DMEM无血清完全培养基培养；转染前换液为Opti‑MEM培养基，并加入所述病毒辅助质粒T7‑IRES‑P/L/NP和所述仙台病毒主骨架质粒；在lipo3000中添加聚乙烯亚胺作为转染试剂进行转染；将转染后的细胞体进行增殖培养，收集重组仙台病毒。
用于人体细胞编程重组仙台病毒制备方法及其应用

[发明专利]重组溶瘤腺病毒、用于制备该重组溶瘤腺病毒的重组溶瘤腺病毒载体及其构建方法和应用-CN201810206375.1有效
发明人：孟二红 -专利权人：北京多赢时代转化医学研究院
申请日： 2018-03-13 - 公布日： 2021-01-05 - 主分类号： C12N15/861 文献下载
摘要：本发明公开了重组溶瘤腺病毒、用于制备该重组溶瘤腺病毒的重组溶瘤腺病毒载体及其构建方法和应用，所述重组溶瘤腺病毒载体的构建方法包括以下步骤：在腺病毒质粒中引入编码RGD肽的基因，构成靶向性骨架质粒；将shRNA抗肿瘤干细胞标志分子ALDH1A1的基因序列以及促凋亡基因PUMA的基因序列连接至第一穿梭质粒，构成第二穿梭质粒；将人端粒逆转录酶启动子连接至第二穿梭质粒，构成第三穿梭质粒；将第三穿梭质粒与靶向性骨架质粒在大肠杆菌中重组为重组溶瘤腺病毒载体
重组溶瘤腺病毒用于制备载体及其构建方法应用

[发明专利]一种靶向wnt信号通路溶瘤腺病毒的构建方法-CN201611091529.4有效
发明人：王毅刚;章健;金槿;马步云;李强;来维洁 -专利权人：浙江理工大学
申请日： 2016-12-01 - 公布日： 2019-08-13 - 主分类号： C12N7/01 文献下载
摘要：本发明提供了一种靶向wnt信号通路溶瘤腺病毒的构建方法，包括将启动子插入pXC2‑Δ24中并连接到质粒中，酶切；将TSLC1基因与质粒连接，将连接产物与DH5α感受态细胞混合，酶切；将上述两个步骤得到的终产物连接，转化到含有全序列腺病毒骨架的质粒大肠杆菌中重组，产生E1A区由启动子控制代替E1A内源启动子的以及缺失E1A‑CR2区的24碱基的腺病毒骨架DNA质粒；腺病毒骨架DNA质粒用pacⅠ酶切线性转化后，转染到
一种靶向 wnt 信号通路溶瘤腺病毒构建方法

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