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[发明专利]一种高效去除逆转录体系中残留引物的方法及应用-CN202211648359.0在审
发明人：苟德明;王俊 -专利权人：深圳大学
申请日： 2022-12-21 - 公布日： 2023-03-14 - 主分类号： C12Q1/6806 文献下载
摘要：本发明提供了一种高效去除逆转录体系中残留引物的方法及应用。所述方法采用两步法进行逆转录并同时去除逆转录反应体系中残留逆转录引物。本发明在RNA逆转录反应发生后使用核酸外切酶消化逆转录体系中残留的逆转录引物，能够实现微量小RNA逆转录后不受残留逆转录引物对下游实验的影响。同时，本发明优化了兼容核酸外切酶的逆转录反应体系，可以实现在不影响逆转录效率的情况下，无需对逆转录产生的一链cDNA进行纯化，而直接加入核酸外切酶进行残留逆转录引物的消化。与传统方法比较，本发明实现了更早期的对残留逆转录引物的高效去除，使其在PCR过程中不再产生干扰效应，无需进行核酸电泳纯化目的条带，简化了实验方案。
一种高效去除逆转录体系残留引物方法应用

[发明专利]新型微核糖核酸定量PCR（聚合酶链式反应）检测方法-CN200610027217.7有效
发明人：谭玉龙;张中华;段春晓;张佩琢 -专利权人：上海吉玛制药技术有限公司
申请日： 2006-06-01 - 公布日： 2007-12-05 - 主分类号： C12Q1/68 文献下载
摘要：它应用逆转录引物的5′端和3′端临近碱基互补形成茎环状结构，利用逆转录引物3′端与靶核酸互补结合，应用逆转录酶进行逆转录反应；以逆转录引物中的部分序列作为PCR引物之一，对逆转录反应得到的cDNA进行扩增
新型核糖核酸定量 pcr 聚合链式反应检测方法

[发明专利]一种逆转录miR-505的茎环引物的设计方法-CN201410606864.8有效
发明人：熊黎;肖君华;周宇荀;仝莉;王茂春 -专利权人：东华大学
申请日： 2014-10-31 - 公布日： 2016-11-16 - 主分类号： C12Q1/68 文献下载
摘要：本发明涉及一种逆转录miR‑505的茎环引物的设计方法，包括：以miRNA‑505‑3P基因为特异性的转录本，分别将该逆转录茎环引物的茎部碱基对的数量和环部的碱基个数规律的设计对应的几个梯度，经过对miRNA‑505‑3P的逆转录和real time‑PCR检测，最终筛选出一个对于miRNA‑505‑3P基因特异性逆转录时效率最佳的逆转录茎环引物。本发明避免了对成熟体检测的干扰，通过茎环引物在茎部和环部的梯度性的调整，可以分别明确的看出环部碱基的结构和茎部碱基的结构分别对逆转录茎环引物的逆转录效率的影响，因此更容易设计出合理高效的逆转录引物。
一种逆转录 mir 505 引物设计方法

[发明专利]疟原虫和猴D型逆转录病毒的检测试剂、试剂盒及双重PCR检测方法-CN202210963988.6在审
发明人：朱婷;杨玲焰;许姗姗;时长军 -专利权人：苏州西山生物技术有限公司
申请日： 2022-08-11 - 公布日： 2023-03-14 - 主分类号： C12Q1/70 文献下载
摘要：本发明涉及一种疟原虫和猴D型逆转录病毒的检测试剂、试剂盒及双重PCR检测方法，检测试剂包括引物、探针和阳性质控质粒，所述引物包括疟原虫上游引物、疟原虫下游引物、猴D型逆转录病毒上游引物和猴D型逆转录病毒下游引物，所述探针包括疟原虫探针、猴D型逆转录病毒探针a、猴D型逆转录病毒探针b，疟原虫扩增片段长度为199 bp，猴D型逆转录病毒扩增片段长度为122 bp。本发明能特异性识别疟原虫及猴D型逆转录病毒，本发明还揭示了采用该引物、探针的双重实时荧光定量PCR试剂盒，敏感性高、特异性强、重复性好，能够为非人灵长类实验动物临床诊断和疫情监控提供有力的支持。
疟原虫逆转录病毒检测试剂试剂盒双重 pcr 方法

[发明专利]高效RNA逆转录合成cDNA的方法-CN201210478994.9有效
发明人：白宪鹤;付光宇;李桂林;高利飞;张岚;马建军;吴学炜;苗拥军 -专利权人：郑州安图绿科生物工程有限公司
申请日： 2012-11-23 - 公布日： 2013-02-27 - 主分类号： C12P19/34 文献下载
摘要：本发明公开了一种高效RNA逆转录合成cDNA的方法，它是以正链RNA或mRNA为模板，使用逆转录引物，在逆转录酶的作用下进行cDNA的合成；其中：所选逆转录模板的目标区段的3’端依次称为特异性引物结合区R1、间隔区S和部分模板片段区R2；所用的逆转录复合序列引物由分别含有模板负链序列和正链序列的两段脱氧核苷酸片段组合而成：其中逆转录引物的3’端的P1区是一组和模板特异性引物结合区R1相互补的特异性脱氧核苷酸序列，逆转录引物的5’端的P2区是一组和部分模板片段区R2序列相同的特异性脱氧核苷酸序列。
高效 rna 逆转录合成 cdna 方法

[发明专利]一种基于茎环法的多重荧光定量PCR检测非编码小RNA的引物组-CN202011534669.0有效
发明人：周其伟;王军;刘刚 -专利权人：广州血康陆道培生物技术有限公司
申请日： 2020-12-22 - 公布日： 2022-01-18 - 主分类号： C12Q1/6851 文献下载
摘要：本发明公开了一种基于茎环法的多重荧光定量PCR检测非编码小RNA的引物组，所述。本发明建立了一种基于茎环法的多重荧光定量PCR检测非编码小RNA方法，实现了1对上下游通用引物同时对多个靶标的逆转录产物的PCR扩增。在逆转录过程中加入了逆转录延伸引物，可以延长逆转录产物，由于增加了扩增产物的长度，可以大大方便上游引物和探针的设计；可将多个靶miRNA在单管反应中进行逆转录，然后再进行多重荧光定量PCR检测，实现基于茎环逆转录引物的的
一种基于茎环法多重荧光定量 pcr 检测编码 rna 引物

[发明专利]RNA检测试剂盒和方法-CN201780045231.6在审
发明人：李哉勋 -专利权人：海姆生物技术有限公司
申请日： 2017-07-20 - 公布日： 2019-04-26 - 主分类号： C12Q1/6827 文献下载
摘要：本发明提供了RNA检测试剂盒和方法，其中将用于逆转录的短引物用于逆转录过程，目的是使引物在逆转录反应溶液中迅速扩散并因此减少逆转录反应时间，使得能够提高整体PCR反应速率并且稳定和迅速地检测RNA。此外，本发明提供了RNA检测试剂盒和方法，其中在逆转录过程之后，通过使用远长于用于逆转录的引物之用于延伸的引物对单链cDNA进行延伸，因此可以获得足够长的模板以进行PCR扩增。
逆转录试剂盒引物检测RNA 逆转录反应溶液逆转录反应单链cDNA 短引物延伸扩散

[发明专利]miR-15a作为主动脉夹层临床筛查分子标记物的应用及其试剂盒-CN201310322182.X有效
发明人：周建;景在平;陆清声;董健;赵志青;包俊敏;冯睿;冯翔;袁良喜 -专利权人：中国人民解放军第二军医大学
申请日： 2013-07-29 - 公布日： 2013-10-23 - 主分类号： C12Q1/68 文献下载
摘要：一种主动脉夹层临床筛查试剂盒，其特征在于，具有：血浆总RNA提取试剂组、外源参照物、RNA逆转录试剂组、RNA逆转录引物组、实时定量PCR试剂组、实时定量PCR引物组和实时定量PCR探针组，其中，RNA逆转录引物组包括miR-15a逆转录引物和外源参照物逆转录引物，实时定量PCR引物组包括miR-15a实时定量PCR引物和外源参实时定量PCR引物，实时定量PCR探针组包括miR-15a实时定量PCR探针和外源参实时定量
mir 15 作为主动脉夹层临床分子标记应用及其试剂盒

[发明专利]miR-23a作为急性主动脉夹层鉴别诊断标记物的应用及其试剂盒-CN201310322822.7有效
发明人：景在平;周建;董健;陆清声;赵志青;包俊敏;冯睿;冯翔;袁良喜 -专利权人：中国人民解放军第二军医大学
申请日： 2013-07-29 - 公布日： 2013-11-20 - 主分类号： C12N15/11 文献下载
摘要：一种急性主动脉夹层鉴别试剂盒，其特征在于，具有：血浆总RNA提取试剂组、外源参照物、RNA逆转录试剂组、RNA逆转录引物组、实时定量PCR试剂组、实时定量PCR引物组和实时定量PCR探针组，其中，RNA逆转录引物组包括miR-23a逆转录引物和外源参照物逆转录引物，实时定量PCR引物组包括miR-23a实时定量PCR引物和外源参实时定量PCR引物，实时定量PCR探针组包括miR-23a实时定量PCR探针和外源参实时定量
mir 23 作为急性主动脉夹层鉴别诊断标记应用及其试剂盒

[发明专利]一体化微小RNA荧光定量检测试剂盒及其应用-CN201510192297.0有效
发明人：王敏 -专利权人：金摩康（上海）生物技术有限公司
申请日： 2015-04-20 - 公布日： 2020-06-09 - 主分类号： C12Q1/6851 文献下载
摘要：具体地，本发明的用于检测微小RNA的试剂盒，包含：(a)用于对微小RNA进行polyA加尾反应和逆转录反应的第一试剂组，包括：用于催化加尾反应的酶、用于催化逆转录反应的酶、用于加尾反应和逆转录反应的缓冲液、以及逆转录引物；和(b)用于进行PCR荧光定量检测的第二试剂组，包括：用于PCR扩增反应的下游通用引物，所述的下游通用引物特异性结合于所述逆转录引物的通用序列区。采用本发明的试剂盒，可以将微小RNA加尾以及逆转录这两步反应合二为一。本发明可用于miRNA、siRNA及piRNA的定量检测,具有广阔的应用前景。
一体化微小 rna 荧光定量检测试剂盒及其应用

[发明专利]一种HBV pgRNA荧光定量PCR检测试剂盒-CN201810682313.8有效
发明人：刘利成;胡小许;王培培;孙娣文;冯华华;李春明 -专利权人：江苏宏微特斯医药科技有限公司
申请日： 2018-06-27 - 公布日： 2020-08-04 - 主分类号： C12Q1/70 文献下载
摘要：本发明提供一种HBV pgRNA荧光定量PCR检测试剂盒，所述试剂盒包括荧光定量PCR扩增的上游引物、下游引物和逆转录引物，所述逆转录引物中与HBV pgRNA Poly A尾进行特异逆转录部分包含15
一种 hbv pgrna 荧光定量 pcr 检测试剂盒

[发明专利]人小RNA129荧光定量试剂盒-CN200710069338.2无效
发明人：王刚;张红河 -专利权人：杭州市第一人民医院
申请日： 2007-06-15 - 公布日： 2008-02-20 - 主分类号： G01N21/00 文献下载
摘要：本发明提供一种人小RNA 129检测试剂盒，由逆转录酶及其反应缓冲液，茎环逆转录引物，Taq DNA聚合酶，荧光定量PCR混合液，荧光定量PCR引物与探针，人工合成的hsa－miR－129标准品及对照品组成，其中逆转录反应液含有逆转录引物129RT－primer、逆转录缓冲液、dNTPs，聚合酶链反应液含有聚合酶链反应缓冲液、MgCl₂、dNTPs、检测用上游引物、检测用下游引物、荧光探针
rna129 荧光定量试剂盒

[发明专利]一种未知融合基因的检测方法-CN202110263664.7在审
发明人：王沛;陈敏;郑乔松;张幸幸;师晓;王京京 -专利权人：北京泛生子基因科技有限公司
申请日： 2021-03-11 - 公布日： 2022-09-20 - 主分类号： C12Q1/686 文献下载
摘要：本发明所要保护的构建未知融合基因检测文库的方法，包括将样本的总RNA在逆转录体系中进行逆转录或将所述总RNA片段化后在逆转录体系中进行逆转录获得逆转录产物；将所得逆转录产物在第一轮扩增体系中进行PCR扩增，获得第一轮PCR扩增产物，所述第一轮扩增体系含有TSO‑F引物和第一特异性引物；将第一轮PCR扩增产物在第二轮扩增体系中进行扩增，获得未知融合基因检测文库，所述第二轮扩增体系含有所述TSO‑F引物、第二特异性引物和Barcode引物。
一种未知融合基因检测方法

[发明专利]一种miRNA引物探针设计方法、试剂盒及一步定量检测方法-CN202310757778.6在审
发明人：王凯;王小梅;宋丽双;赵国栋;熊尚岷 -专利权人：苏州唯善生物科技有限公司
申请日： 2023-06-26 - 公布日： 2023-09-22 - 主分类号： C12Q1/6811 文献下载
摘要：本发明公开了一种miRNA引物探针设计方法、试剂盒及一步定量检测方法，利用本发明提供的引物探针设计方法设计的引物探针，搭配优化的试剂盒，完成对miRNA的一步定量检测，具体步骤包括：s1使用逆转录引物对待检测的miRNA进行逆转录，得到逆转录产物cDNA；s2利用颈环序列与cDNA进行拼接，得到拼接产物；s3使用正向引物、逆转录引物和探针对拼接产物进行荧光定量PCR扩增。本发明将逆转录和PCR检测在同一反应体系中通过一个PCR程序完成，实现对miRNA的一步定量检测，不仅简化操作步骤，也有效避免中途开盖造成污染，具有更高的检测的灵敏度和特异性。
一种 mirna 引物探针设计方法试剂盒一步定量检测

[发明专利]肝癌检测引物探针及其试剂盒-CN201610902482.9在审
发明人：王明;赵会 -专利权人：上海赛安生物医药科技有限公司
申请日： 2016-10-17 - 公布日： 2017-02-22 - 主分类号： C12Q1/68 文献下载
摘要：本发明涉及一种肝癌检测引物探针及其试剂盒，试剂盒包括用于配制数字PCR反应液的数字PCR预混液、液滴稳定剂和miRNAs引物探针混合液，以及用于进行RNA逆转录的茎环逆转录引物混合液；miRNAs引物探针混合液中包括用于检测hsa‑mir‑21、hsa‑mir‑122和hsa‑miR‑199a和hsa‑miR‑1228的上游引物和探针，以及用于检测hsa‑mir‑21、hsa‑mir‑122、hsa‑miR‑199a和hsa‑miR‑1228的通用下游引物；茎环逆转录引物混合液中包括分别用于逆转录hsa‑mir‑21、hsa‑mir‑122和hsa‑miR‑199a和hsa‑miR‑1228的茎环逆转录引物；hsa‑mir‑21、
肝癌检测引物探针及其试剂盒

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