该重组载体为pBAD质粒,pBAD质粒携带具有以下(a)及(b)中至少一种特征的编码序列:(a)与SEQ ID No.1所示的核苷酸序列具有95%以上同源性;(b)编码G3PO,G3PO的氨基酸序列包括如本研究以pBAD质粒为表达载体,以甘油‑3‑磷酸氧化酶的编码序列为目的基因,得到的重组载体在宿主细胞中表达的质粒丢失率较低,性能稳定,有利于高效表达甘油‑3‑磷酸氧化酶,以便于实现甘油‑3‑磷酸氧化酶的工业化生产本研究的重组载体在不同大肠杆菌宿主中进行表达的质粒丢失率低于10%。
本发明涉及一种以噬菌体为基础的穿梭质粒pSW2及其制备方法和应用,所述穿梭质粒的碱基序列如SEQ ID NO.1所示,所述衍生质粒是以绿色荧光蛋白作为报告基因的启动子筛选载体。所述制备方法包括以下步骤:敲除噬菌体中质粒复制表达非必需的基因,融合氯霉素基因、克隆复制起始位点、克隆结合转移元件、多克隆位点插入到所述噬菌体基因区域,获得pSW2表达载体;同时将绿色荧光蛋白插入多克隆位点本发明提供的穿梭质粒能够在大肠杆菌内和不同的希瓦氏菌中复制表达,同时可作为基因回补载体应用于希瓦氏菌基因的功能鉴定,也可以在低温下高效表达外源基因。
Human Fibrinogen-like protein 2,hfgl2)凝血酶原酶、Fas和肿瘤坏死因子受体I(tumor necrosis factor,TNFR1)基因的microRNA腺病毒表达质粒,在细胞水平检测microRNA干扰质粒的有效性和特异性,建立三种microRNA腺病毒表达质粒联合应用于治疗重型肝炎。本发明采用pAd/CMV/V5-DEST载体和hfgl2、hFas、hTNFR1的pcDNA表达质粒通过Gateway技术,构建pAd-hfgl2、pAd-hFas、pAd-hTNFR1。