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[发明专利]一种用于组织工程支架的细胞循环接种装置及方法-CN202310476679.0在审
发明人：吴刚;李叶密 -专利权人：华南理工大学
申请日： 2023-04-28 - 公布日： 2023-08-11 - 主分类号： C12M3/00 文献下载
摘要：本发明属于生物医学实验仪器领域，公开了一种用于组织工程支架的细胞循环接种装置及方法。本发明的细胞循环接种装置包括固定装置、接种平台、循环装置；接种平台包括接种腔、支架固定夹、支架固定夹槽、取样门、接种孔、旋转轴、皮带、电机，循环装置包括活塞装置、注射泵、三通阀、单向阀、导管。组织工程支架固定在接种平台，开启电机带动组织工程支架旋转，循环装置中的细胞液腔加入细胞悬液，注射泵驱动活塞使细胞悬液经过组织工程支架，细胞吸附在支架表面，掉落的细胞悬液通过活塞回复返回细胞液腔，形成动态循环回路，接种完毕后从取样门将组织工程支架取出。本发明可显著提高细胞接种效率和支架材料细胞分布均匀度，结构简单，操作简便。
一种用于组织工程支架细胞循环接种装置方法

[发明专利]高准确性的细胞周期的检测方法-CN202110953686.6在审
发明人：朱灏 -专利权人：华夏源（上海）生命科技有限公司
申请日： 2021-08-19 - 公布日： 2022-09-20 - 主分类号： G01N1/28 文献下载
摘要：本发明涉及化学检测领域，所述IPC分类号为G01N33/53，具体涉及高准确性的细胞周期的检测方法。高准确性的细胞周期的检测方法，包括以下步骤：(1)细胞融解：取装有冻存物的冻存管融解、离心、重悬得到复苏细胞；(2)细胞接种：取复苏细胞接种于培养瓶中得到接种细胞；(3)细胞固定：收集接种细胞洗涤、离心、去上清、沉淀重悬后使用细胞固定液固定细胞；(4)酶解：将固定后的细胞配制成细胞悬液，然后向细胞悬液中加入酶溶液，得到酶解液；(5)染色：向酶解液中加入染色液、混匀，避光孵育，得检测液；(6)上机检测：检测液使用流式细胞分析仪上机检测、分析。使用本发明的方法能够准确的对间充质干细胞的细胞周期进行检测。
准确性细胞周期检测方法

[发明专利]一种用于组织工程支架的高效细胞接种装置及方法-CN202211041745.3在审
发明人：刘华振;刘媛媛;简志安;张毅;高闯;陆春祥;乔浩 -专利权人：上海大学
申请日： 2022-08-29 - 公布日： 2022-10-14 - 主分类号： C12M3/00 文献下载
摘要：本发明公开了一种用于组织工程支架的高效细胞接种装置及方法，其中，细胞接种装置包括支架固定装置、取液装置以及支撑装置；支架固定装置包括支架固定夹以及支架固定夹安装机构，取液装置包括活塞装置、电机、传动轴以及推卸器本发明细胞接种装置中的取液装置可吸取细胞悬液，并可与支架固定装置连接；电机驱动传动轴通过活塞在接种腔中吸取细胞悬液；支架固定装置可固定组织工程支架，吸取细胞悬液通过组织工程支架时，种子细胞会被吸附在支架表面及内部，驱动推卸器可使支架固定装置与取液装置分离，方便组织工程支架取出。本发明实现了细胞均匀及定量接种的同步进行，操作简便，相对于传统的接种方法，提高了接种效率。
一种用于组织工程支架高效细胞接种装置方法

[发明专利]一种培养胰腺干/祖细胞的方法-CN201110344555.4无效
发明人：韩忠朝;马凤霞 -专利权人：中国医学科学院血液病医院（血液学研究所）
申请日： 2011-11-04 - 公布日： 2012-02-29 - 主分类号： C12N5/074 文献下载
摘要：本发明公开了一种培养胰腺干/祖细胞的方法，包括以下步骤：将胰腺干/祖细胞接种于微孔培养板中，接种结束后，立即快速将接种板翻转，使接种的细胞悬液和培养液的混合物在接种板表面形成吸附于接种板的向下的悬滴，而不至于导致液体滴落或溅出；在悬滴状态下培养至细胞形成细胞球之后，将细胞球转移至漂浮的培养膜上继续培养至形成具有生理学功能的结构。本发明的悬滴培养法简单方便，不需要特定的生物材料，而且细胞间的接触更为紧密，能够更好地模拟体内生长环境。
一种培养胰腺细胞方法

[发明专利]一种小鼠被毛毛囊毛乳头细胞提取方法-CN202210769258.2在审
发明人：苗勇;杜丽娟;胡志奇 -专利权人：南方医科大学南方医院
申请日： 2022-07-01 - 公布日： 2022-08-12 - 主分类号： C12N5/071 文献下载
摘要：本发明公开一种小鼠被毛毛囊毛乳头细胞提取方法，包括：将真皮细胞重悬混悬液与10％Ficoll混合，形成细胞‑Ficoll混悬液；取试管加入10％Ficoll，将细胞‑Ficoll混悬液加入，形成密度梯度混悬液，离心；收集沉淀接种培养；观察幼稚毛囊结构贴壁丧失原有三维结构，毛乳头球仍保持界限分明的球形结构后，加入蛋白酶消化，终止消化后收集细胞；重悬沉淀后，与10％Ficoll充分混合；取试管，加入10％Ficoll，将细胞‑Ficoll混悬液加入，形成密度梯度混悬液，离心；收集DP球接种培养，待DP球中细胞完全迁出后消化传代。本发明利用离心力和优化的密度梯度分层，可高效获得大量小鼠被毛毛乳头细胞。
一种小鼠毛毛乳头细胞提取方法

[发明专利]一种体外纯化培养大鼠胚胎海马放射状胶质细胞的方法-CN202011605023.7在审
发明人：邹琳清 -专利权人：南通大学
申请日： 2020-12-30 - 公布日： 2021-04-09 - 主分类号： C12N5/079 文献下载
摘要：本发明公开了一种体外纯化培养大鼠胚胎海马放射状胶质细胞的方法，其包括，获取孕鼠大脑皮质和海马组织；用DMEM/F12基础培养液制备所述海马组织的单细胞悬液；用神经干细胞培养液重悬，接种、培养形成细胞球；消化所述细胞球，终止后过滤得单细胞悬液，接种后传代培养，收集细胞球；消化收集到的所述细胞球，终止后用神经干细胞培养液重悬，接种，让悬浮的单细胞贴壁，继续用神经干细胞培养液培养；所述神经干细胞培养液由DMEM
一种体外纯化培养大鼠胚胎海马放射胶质细胞方法

[发明专利]一种哺乳动物细胞的瞬时转染方法-CN202310584660.8在审
发明人：陈滨;金圣杰 -专利权人：皓阳生物科技（上海）有限公司
申请日： 2023-05-23 - 公布日： 2023-09-19 - 主分类号： C12N15/85 文献下载
摘要：本发明提供一种哺乳动物细胞的瞬时转染方法，包括以下步骤：细胞培养：取密度为7‑9×106cells/ml的传代细胞培养液，离心，重悬细胞，重悬后的细胞密度为4.8‑5.6×105cells/ml，培养44‑52h；细胞转染：取培养后的细胞悬液，分别向其中添加质量体积比为1:3‑1:6的质粒DNA和PEI溶液，质粒DNA的添加量为本发明在细胞接种阶段进行细胞的重悬换液，提高细胞接种密度，在接种后48小时左右，直接转染，无需换液，降低培养基消耗；调整DNA:PEI的转染比例，使目标蛋白表达量明显提高。
一种哺乳动物细胞瞬时转染方法

[发明专利]基于三维细胞培养支架的细胞培养方法-CN201810985468.9在审
发明人：李晓琳;李慧伦;邓洁敏;袁晔;袁建华 -专利权人：广州洁特生物过滤股份有限公司
申请日： 2018-08-28 - 公布日： 2020-03-06 - 主分类号： C12N5/00 文献下载
摘要：本发明涉及一种基于三维细胞培养支架的细胞培养方法。该细胞培养方法包括以下步骤：1)制备接种细胞的悬浮液，得细胞悬液，后将三维细胞培养支架悬空，将细胞悬液滴加至三维细胞培养支架表面，静置；细胞悬液的滴加速率为20μL/s～60μL/s，细胞悬液的滴加量为2μL/cm2～10μL/cm2；2)将滴加有细胞悬液的三维细胞培养支架放置于培养装置内，将培养装置放入培养箱内进行细胞预培养；3)取出所述培养装置，将预热后的细胞培养液添加至培养装置中，浸没三维细胞培养支架，并将三维细胞培养支架沉入所述培养装置底部，进行细胞培养。该基于三维细胞培养支架的细胞培养方法能够极大提高三维细胞培养支架的细胞接种率。
基于三维细胞培养支架方法

[发明专利]一种采用两次细胞培养工艺提高病毒液病毒含量的方法-CN201611153492.3有效
发明人：吴越;万成燕;冯锡良;周俊花;曾衍华;陈树林;黄梅 -专利权人：四川省华派生物制药有限公司
申请日： 2016-12-14 - 公布日： 2019-12-10 - 主分类号： C12N7/00 文献下载
摘要：本发明公开了一种采用两次细胞培养工艺提高病毒液病毒含量的方法，包括细胞培养：取生长良好的传代细胞；传代时细胞的接种密度为20万~40万个/ml，获得接种细胞；制备种毒：取生长良好的传代细胞加入生长液使传代细胞长成单层后弃掉生长液接种基础种毒，冻融后收获得到生产用种毒；制备细胞悬液以及制备病毒液。本发明在现有常规的生产工艺上进行了优化，在单层细胞接种后再加入细胞悬液进行两次细胞培养工艺，能够打破现有生产工艺的瓶颈，有效提高病毒液中病毒的含量和滴度，有效缩短生产周期，提高产品质量，降低生产成本；同时本发明的方法还具有操作简单和重复性好的特点
传代细胞病毒液种毒接种细胞培养工艺生长液制备生产工艺细胞培养传代缩短生产周期制备细胞悬液病毒单层细胞接种细胞细胞悬液常规的生长单层滴度冻融瓶颈细胞收获优化生产

[发明专利]小鼠黑色素细胞与角化细胞的共培养方法-CN201810142559.6在审
发明人：杨姗姗;董常生;范瑞文;姬凯元 -专利权人：山西农业大学
申请日： 2018-02-11 - 公布日： 2018-06-26 - 主分类号： C12N5/071 文献下载
摘要：本发明公开了一种小鼠黑色素细胞与角化细胞的共培养方法，是以进行1次传代培养得到的小鼠黑色素细胞和角化细胞作为接种细胞，先将角化细胞重悬液接种在预先铺布鼠尾胶原的培养皿中，再接种黑色素细胞重悬液，并加入黑色素细胞专用培养基和角化细胞专用培养基，于5% CO2细胞培养箱中37℃下进行共培养。以本发明方法共培养黑色素细胞与角化细胞，不仅实现了角化细胞的多代传代培养，且共培养体系中的黑色素含量显著增加。
角化细胞黑色素细胞小鼠黑色素专用培养基传代培养重悬液细胞接种培养皿细胞培养箱接种细胞培养体系鼠尾胶原黑色素多代铺布

[发明专利]动物细胞多孔微载体固定化高效培养方法及其培养基-CN200310124257.X无效
发明人：胡显文;肖成祖;高丽华;李佐虎;陈照烈;刘红;胥照平;张正光;李世崇;王菲 -专利权人：中国人民解放军军事医学科学院生物工程研究所
申请日： 2003-12-31 - 公布日： 2004-12-22 - 主分类号： C12N5/06 文献下载
摘要：本发明公开了一种动物细胞多孔微载体固定化高效培养方法，包括如下步骤：(1)纤维素多孔微载体预处理；(2)细胞接种：搅拌瓶中加入处理好的多孔微载体和含血清培养基，将细胞悬液按所需接种密度接种到搅拌瓶中培养；(3)细胞驯化：将生长在多孔微载体上的细胞悬液在搅拌瓶中逐级放大培养，并将培养基中的血清含量逐渐降到0％；(4)细胞培养：将细胞悬液转移至反应器中逐级放大培养，定期更新部分微载体，对细胞进行无血清培养本发明的优点是：(1)细胞培养密度高；(2)可方便放大培养规模；(3)细胞培养时间长，一般可达100天左右；(4)无血清培养基价格低廉；(5)反应器的生产能力高；(6)适用于贴壁细胞和悬浮细胞的培养。
动物细胞多孔载体固定高效培养方法及其培养基

[发明专利]一种应用于组织工程椎间盘髓核构建的种子细胞接种方法-CN200810069602.7无效
发明人：黄博;李长青;周跃 -专利权人：中国人民解放军第三军医大学第二附属医院
申请日： 2008-04-29 - 公布日： 2008-10-15 - 主分类号： C12N5/06 文献下载
摘要：本发明提出一种应用于组织工程椎间盘髓核构建的种子细胞接种方法，采用的种子细胞接种载体为透明质酸，接种步骤为：首先将人或动物的椎间盘髓核细胞与透明质酸溶液进行混悬，再将支架材料用培养液浸泡后吸干水分待用，然后用细胞悬液缓慢滴加至支架材料，静置，最后将细胞－支架复合体移入到培养瓶中，缓慢加入培养液培养，直到细胞在支架材料内进行增殖并合成细胞外基质，即可移植入动物或人体内进行研究或治疗。该方法简单，具有更加的安全、仿生并且可以提高所构建组织的生物学性能，提高种子细胞的上架率和种子细胞在支架内分布的均匀程度等优点。
一种应用于组织工程椎间盘构建种子细胞接种方法

[发明专利]促进人脂肪干细胞增殖的方法-CN201811164271.5在审
发明人：赵立士;陈名星 -专利权人：淮安康宜莱干细胞生物科技有限公司
申请日： 2018-10-05 - 公布日： 2018-12-18 - 主分类号： C12N5/0775 文献下载
摘要：本发明公开了促进人脂肪干细胞增殖的方法，包括：取新鲜的人脂肪组织，PBS缓冲液冲洗，除去脂肪组织膜和血管后剪成碎块，消化，消化结束后加入完全培养基，200目滤网过滤去除未消化的纤维结缔组织，离心、弃上清去除悬浮的脂肪细胞及脂滴，细胞沉淀重悬于完全培养基，加入红细胞裂解液，混匀后常温解育，离心、去上清；细胞沉淀重悬于完全培养基，接种于培养瓶中，培养24h后换培养液除去未贴壁细胞，之后每3天换液，细胞融合后消化，传代；取传代细胞，消化制成细胞悬液，接种于培养瓶中，培养于完全培养基中培养24h后，更换为含罗汉柏烯酮的完全培养基继续培养。
完全培养基消化脂肪干细胞细胞沉淀培养瓶增殖的去除重悬接种培养液传代碎块红细胞裂解液人脂肪组织未贴壁细胞传代细胞结缔组织罗汉柏烯细胞融合细胞悬液脂肪细胞脂肪组织目滤网换液混匀脂滴冲洗过滤悬浮纤维血管新鲜

[发明专利]一种促进人脂肪干细胞增殖的方法-CN201811164272.X在审
发明人：赵立士;陈名星 -专利权人：淮安康宜莱干细胞生物科技有限公司
申请日： 2018-10-05 - 公布日： 2019-01-08 - 主分类号： C12N5/0775 文献下载
摘要：本发明公开了一种促进人脂肪干细胞增殖的方法，包括：取新鲜的人脂肪组织，PBS缓冲液冲洗，除去脂肪组织膜和血管后剪成碎块，消化，消化结束后加入完全培养基，200目滤网过滤去除未消化的纤维结缔组织，离心、弃上清去除悬浮的脂肪细胞及脂滴，细胞沉淀重悬于完全培养基，加入红细胞裂解液，混匀后常温解育，离心、去上清；细胞沉淀重悬于完全培养基，接种于培养瓶中，培养24h后换培养液除去未贴壁细胞，之后每3天换液，细胞融合后消化，传代；取传代细胞，消化制成细胞悬液，接种于培养瓶中，培养于完全培养基中培养24h后，更换为含茅术醇或沉香螺环醇的完全培养基继续培养。
完全培养基消化脂肪干细胞细胞沉淀培养瓶增殖的去除重悬接种培养液沉香传代碎块红细胞裂解液人脂肪组织未贴壁细胞传代细胞结缔组织细胞融合细胞悬液脂肪细胞脂肪组织目滤网换液混匀螺环茅术脂滴冲洗过滤悬浮纤维血管新鲜

[发明专利]提高口蹄疫病毒表达水平的方法-CN202010858051.3有效
发明人：陈文庆;周劲松;徐舸辰;王杰勇 -专利权人：天信和（苏州）生物科技有限公司
申请日： 2020-08-24 - 公布日： 2023-05-16 - 主分类号： C12N7/00 文献下载
摘要：本发明提供一种提高口蹄疫病毒表达水平的方法，包括：步骤1，在反应器中培养待接种病毒的细胞，并获得细胞悬液；步骤2，将所述细胞悬液的培养温度调整为25‑36℃；步骤3，在所述细胞悬液的温度稳定后，接种口蹄疫病毒根据本发明的提高口蹄疫病毒表达水平的方法，能够促进口蹄疫病毒感染细胞、提高病毒的表达水平，并且对之后的纯化、病毒效价没有不良影响。
提高口蹄疫病毒表达水平方法

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