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[发明专利]一种改良的真菌原生质体的制备方法-CN201910893346.1在审
发明人：黄龙花;史钏;刘远超;莫伟鹏;梁晓薇;胡惠萍 -专利权人：广东省微生物研究所(广东省微生物分析检测中心);广东粤微食用菌技术有限公司
申请日： 2019-09-20 - 公布日： 2019-12-27 - 主分类号： C12N1/14 文献下载
摘要：本发明公开了一种改良的真菌原生质体的制备方法。真菌菌丝经洗涤、酶解破壁、收集原生质体，然后进行再生培养，最后挑取目标单菌落，并进行是否单核体检验，获得原生质体单核菌株；所述的真菌菌丝的制备方法为：在真菌固体培养基上覆盖一层灭菌的膜得到带膜培养基，在带膜培养基上接种真菌，然后培养直至长出菌丝，取膜上菌丝，即获得真菌菌丝。本发明的改良的真菌原生质体制备方法，其污染率低、原生质体的数量、再生率和单核率高，为真菌组学研究和杂交育种提供稳定高效的基础技术支撑。
原生质体真菌菌丝培养基真菌菌丝制备杂交育种改良真菌原生质体原生质体制单核菌株基础技术酶解破壁再生培养真菌固体单核体单菌落污染率灭菌单核组学洗涤接种再生覆盖支撑检验研究

[发明专利]楸树内生真菌的原生质体的制备方法-CN201410016834.1有效
发明人：苗志奇;陈榕华;朱闪烁;于湘莉;唐克轩 -专利权人：上海交通大学
申请日： 2014-01-14 - 公布日： 2014-04-30 - 主分类号： C12N1/14 文献下载
摘要：本发明提供了一种楸树内生真菌的原生质体的制备方法；所述方法包括以下步骤：步骤1，菌丝体的制备；步骤2，原生质体的制备；步骤3，原生质体纯化；步骤4，原生质体再生。本发明所述方法制备的原生质体数量较多，可达到6×10⁷个/毫克菌丝，获得的原生质体的活力较高，再生率可达到1.2%。本发明选择培养12-24h的菌丝体，真菌处于快速生长期，生长快，细胞壁易于酶的裂解，释放出的原生质体的数量多，不易裂解，活力高。本发明选取5～30mg/ml Glucanex复合酶作为细胞壁裂解酶液，裂解效率高，原生质体释放数量多。本发明选用KCl或NaCl作为渗透压稳定剂，保证了原生质体制备数量与原生质体的稳定。
楸树内生真菌原生质体制备方法

[发明专利]一种假拟盘多毛孢属真菌原生质体的制备方法及遗传转化体系的构建方法-CN202310535560.6在审
发明人：吕务云;徐婷;王玉春;蒋鸿;涂一怡;曹清海;黄超;任恒泽;王新超 -专利权人：浙江农林大学
申请日： 2023-05-12 - 公布日： 2023-08-01 - 主分类号： C12N1/06 文献下载
摘要：本发明属于微生物遗传转化技术领域，具体涉及一种假拟盘多毛孢属(Pseudopestalotiopsiscamelliae‑sinensis)真菌原生质体的制备方法及遗传转化体系的构建方法。本发明以酶解液对假拟盘多毛孢属真菌幼嫩菌丝进行裂解制备假拟盘多毛孢属真菌原生质体，获得的原生质体数量适宜，质量好，且步骤简便易操作。以此方法获得的假拟盘多毛孢属真菌原生质体可以快速有效地进行PEG介导的假拟盘多毛孢属真菌遗传转化，且转化效率较高。
一种假拟盘多毛孢属真菌原生质体制备方法遗传转化体系构建

[实用新型]一种用于丝状真菌原生质体过滤装置-CN202120953786.4有效
发明人：曹树威;余昌花;邱磊;杨启晟;黄春花;王自豪;陈政谕;甘露;黄焕昌;卢文宜;刘克俊;向雷 -专利权人：广西壮族自治区畜牧研究所
申请日： 2021-05-07 - 公布日： 2021-12-17 - 主分类号： C12M1/12 文献下载
摘要：本实用新型涉及丝状真菌原生质体过滤技术领域，且公开了一种用于丝状真菌原生质体过滤装置，包括固定架、初滤机构和圆锥形过滤器，所述圆锥形过滤器设置于固定架的右侧。该一种用于丝状真菌原生质体过滤装置，通过注射器吸取酶解后混有杂质的原生质体，并通过注射器注入到可换膜针孔过滤器中，通过三层第一尼龙滤膜和六层纱布层进行对原生质体进行初步过滤，过滤掉大量的菌丝和杂质，初步过滤后的原生质体进入到圆锥形过滤器中，并通过圆锥形过滤器中的第二尼龙滤膜进行复滤，进一步对原生质体进行提纯，结构简单，不需要通过增加降解时间进行菌丝杂质去除，保护了原生质体的质量，简化了工作流程，提高了效率，同时避免了杂菌的污染。
一种用于丝状真菌原生质体过滤装置

[发明专利]一种根结线虫生防真菌交枝顶孢原生质体制备与再生方法-CN202010724152.1有效
发明人：姚玉荣;郝永娟;霍建飞;贲海燕;刘晓琳;高苇;王万立 -专利权人：天津市农业科学院
申请日： 2020-07-24 - 公布日： 2023-04-14 - 主分类号： C12N1/14 文献下载
摘要：本发明公开了一种根结线虫生防真菌交枝顶孢原生质体制备与再生方法。属于农业植物保护技术领域。包括如下步骤：菌株活化；孢子悬浮液的制备；团状菌丝体制备；原生质体的制备；原生质体的再生。与现有技术相比，本发明取得的有益效果为：提供了一种操作简单、重复性好、制备原生质体活力高的根结线虫生防真菌交枝顶孢原生质体制备与再生方法，原生质体的再生率达到了17.78％，为A.implicatum遗传转化体系的建立以及该菌生防机理的研究奠定良好的基础
一种线虫真菌交枝顶孢原生质体制备再生方法

[发明专利]一种长柄类大型真菌的超大原生质体及其制备方法-CN202111052407.5在审
发明人：严俊杰;韩星;甘炳成;苗人云;冯仁才;赵金;林俊彬;甘颖 -专利权人：中国农业科学院都市农业研究所
申请日： 2021-09-08 - 公布日： 2021-12-03 - 主分类号： C12N1/14 文献下载
摘要：本发明公开了一种长柄类大型真菌的超大原生质体及其制备方法，属于原生质体制备技术领域，该制备方法主要包括以下步骤：首先将长柄类大型真菌子实体样品横切取下菌柄区段，然后将菌柄区段纵切得到若干细条型的样品组织块再将所得的样品组织块置于装有酶解液的装置中涡旋振荡1～3分钟后，然后将装置置于恒温摇床中，于25～30℃温度下酶解2～4小时；最后将样品进行过滤得到滤液，并将所得的滤液进行离心去除酶解液，得到长柄类大型真菌的超大原生质体与现有常规方法相比，本发明获得的原生质体直径可达20～50μm，是常规方法制备的原生质体的4～10倍，有效解决了现有技术中存在原生质体直径小和显微操作困难的问题。
一种长柄类大型真菌超大原生质体及其制备方法

[发明专利]一种麝香霉菌原生质体制备和再生方法-CN202111415666.X在审
发明人：陈晨;杨斌刚;陈慧;房婧雅;许谨;徐希辉 -专利权人：南京农业大学
申请日： 2021-11-25 - 公布日： 2022-03-15 - 主分类号： C12N1/14 文献下载
摘要：本发明细胞工程中丝状真菌原生质体制备与再生领域，公开一种麝香霉菌原生质体制备和再生方法。该方法包括如下步骤：a、活化菌体；b、制备种子培养液；c、细胞壁的酶解d、原生质体悬浮液的制备；e、原生质体的再生。本发明的有益效果在于确定了麝香霉菌ZJLQ024原生质体制备和再生的适宜条件,为麝香霉菌原生质体转化、基因表达等遗传操作奠定基础，提高了转化效率。
一种麝香霉菌原生质体制备再生方法

[发明专利]一种制备食药用真菌原生质体的方法-CN201910864041.8有效
发明人：丁重阳;赵丽婷;徐萌萌;马忠宝;沈梦烨;张琦;刘菁芸;李由然;石贵阳 -专利权人：江南大学
申请日： 2019-09-12 - 公布日： 2021-07-27 - 主分类号： C12N1/14 文献下载
摘要：本发明公开了一种制备高质量食药用真菌原生质体的方法，属于真菌的生物学领域。本发明方法为在食药用真菌静置培养过程中外源添加一定量的苯丙氨酸，使得食药用真菌细胞壁厚度降低58.58％，从而提供有助于原生质体制备的菌丝体，且可以高效、稳定地为食药用真菌遗传转化操作制备高质量原生质体
一种制备药用真菌原生质体方法

[发明专利]一种茶树菇原生质体的制备方法及原生质体单核体菌株的制备方法-CN202210201203.1在审
发明人：不公告发明人 -专利权人：江西省科学院生物资源研究所
申请日： 2022-03-03 - 公布日： 2022-06-07 - 主分类号： C12N1/14 文献下载
摘要：本发明属于丝状真菌的工程细胞的制备技术领域，具体涉及一种茶树菇原生质体的制备方法及原生质体单核体菌株的制备方法。本发明提供了一种茶树菇原生质体的制备方法，本发明制备得到的茶树菇原生质体得率高、制备时间短，将所述茶树菇原生质体悬浮液涂布于再生培养基平板上获得茶树菇原生质体单核体菌株，茶树菇原生质体单核化率高，经单核体菌株对峙培养后，获得两种原生质体单核体菌株交配型；测定茶树菇原生质体单核体菌株交配型为开展茶树菇的杂交育种、融合育种、诱变育种、遗传转化和功能基因挖掘等奠定基础。
一种茶树原生质体制备方法单核菌株

[发明专利]一种亚隔孢壳属真菌Didymella segeticola原生质体的制备方法及遗传转化体系的构建方法-CN202310785861.4在审
发明人：吕务云;张幼;王玉春;涂一怡;徐婷;蒋鸿;黄超;任恒泽;王新超 -专利权人：浙江农林大学
申请日： 2023-06-29 - 公布日： 2023-09-01 - 主分类号： C12N1/14 文献下载
摘要：本发明属于农业植物保护技术领域，公开一种亚隔孢壳属真菌Didymella segeticola原生质体的制备方法及遗传转化体系的构建方法。本发明利用酶解液从D.segeticola菌丝中制备原生质体，获得的D.segeticola原生质体可以有效地用于构建聚乙二醇(Polyethyleneglycol,PEG)介导的原生质体转化体系。本申请提供了快速制备D.segeticola原生质体条件，找到适用D.segeticola的遗传转化体系。
一种亚隔孢壳属真菌 didymella segeticola 原生质体制备方法遗传

[发明专利]一种芦笋茎枯病菌原生质体制备与再生方法-CN201310382669.7有效
发明人：张岳平;陈光宇;罗绍春;周劲松;汤泳萍;黄燕萍 -专利权人：江西省农业科学院蔬菜花卉研究所
申请日： 2013-08-21 - 公布日： 2013-12-18 - 主分类号： C12N1/14 文献下载
摘要：本发明公开了一种芦笋茎枯病菌原生质体制备与再生方法，它涉及细胞工程中真菌原生质体制备与再生技术领域。它的具体操作步骤如下：(1)制备芦笋茎枯病菌分生孢子悬液；(2)制备新鲜菌丝体；(3)酶解菌丝细胞壁：(4)原生质体分离；(5)原生质体再生。本发明易于操作，对设备要求低，同时酶解时间及再生周期短，有效提高了原生质体制备及再生的效率。
一种芦笋病菌原生质体制备再生方法

[发明专利]一种羊肚菌原生质体的制备方法-CN201811404287.9在审
发明人：刘士旺;楼坚;柳永;龚金炎;方若思;鲍文娜;楚秉泉;张亚青;翁倩 -专利权人：浙江科技学院
申请日： 2018-11-23 - 公布日： 2019-03-15 - 主分类号： C12N1/14 文献下载
摘要：本发明属于真菌的生物学领域，具体公开了一种羊肚菌原生质体的制备方法，该制备方法包括如下步骤：S1、制备菌丝体培养基；S2、制备再生培养基；S3、培养菌丝体；S4、原生质体的制备；S5、原生质体纯化；S6、原生质体再生。本发明方法所述原生质体制备过程中以四氢吡啶为渗透压调节剂，谷胱甘肽为原生质体保护剂，在一个高渗的环境中加入复合酶进行破壁处理，起到双层协同保护原生质体免于膨胀破裂的作用，本发明方法，工艺简单，便于操作，
原生质体制备羊肚菌菌丝体培养基渗透压调节剂原生质体再生生物学领域原生质体制再生培养基谷胱甘肽可重复性破壁处理四氢吡啶保护剂复合酶菌丝体真菌破裂协同膨胀

[发明专利]利用PTC转化缓冲液将外源基因转入灵芝真菌的方法-CN201510226811.8在审
发明人：李刚;刘铁平 -专利权人：江苏中祥高科技实业有限公司
申请日： 2015-05-06 - 公布日： 2015-07-22 - 主分类号： C12N15/09 文献下载
摘要：本发明提供了一种利用PTC转化缓冲液将外源基因转入灵芝真菌的方法，所述的方法是用溶壁酶将灵芝菌丝体酶解成原生质体，所制备的原生质体经精制、纯化后、利用PTC转化缓冲液，以纯化的灵芝原生质体作为受体细胞，将含有外源基因的真菌表达载体转入灵芝原生质体中，再将转化后的灵芝原生质体进行再生培养和选择性培养，从而获得灵芝转化株。
利用 ptc 转化缓冲液将外源基因转入灵芝真菌方法

[发明专利]一种白腐真菌的原生质体制备方法-CN200910228484.4无效
发明人：范寰;廖伟 -专利权人：天津市畜牧兽医研究所
申请日： 2009-11-18 - 公布日： 2010-05-26 - 主分类号： C12N1/14 文献下载
摘要：一种白腐真菌的原生质体的制备方法，接PDA固体培养基上健壮菌丝体于液体培养基中培养240-290h，用0.1％-0.3％β-巯基乙醇预处理菌丝体，采用溶菌酶、纤维素酶、蜗牛酶的混合酶：酶液pH4-7，在26-32℃酶解1-4h，用0.6mol/L MgSO4做渗透压稳定剂时，原生质体数量达到5-8×106个/mL。本发明效果是：本白腐真菌的原生质体制备方法，制备工艺简单，易操作。原生质体的制备率达到5-8×106个/mL。
一种真菌原生质体制备方法

[发明专利]米曲霉原生质体的制备方法-CN201511004097.4在审
发明人：曾斌;郝庆;刘华 -专利权人：江西科技师范大学
申请日： 2015-12-29 - 公布日： 2016-03-09 - 主分类号： C12N1/14 文献下载
摘要：本发明公开一种丝状真菌米曲霉原生质体的制备方法，涉及生物工程中原生质体制备的方法技术领域。该方法包括：米曲霉的培养，收集菌丝、酶解等。采用本发明方法，原生质体产量可达1.5×10⁷个/mL，并且再生率可达90％，对米曲霉基因改造奠定了基础。
曲霉原生质体制备方法

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