本发明涉及一种环氧化物水解酶，其氨基酸序列如SEQ ID NO：2所示。本发明涉及一种环氧化物水解酶的编码基因，其核苷酸序列如SEQ ID NO：1所示。本发明还涉及一种环氧化物水解酶的应用，所述环氧化物水解酶以外消旋的芳香环氧化物为底物制备手性的芳香环氧化物。本发明提供的环氧化物水解酶可以整细胞的湿菌体或冻干菌体的形式，也可以粗酶液或纯酶的形式，以外消旋的芳香环氧化物为底物，制备得到对映纯的手性的芳香环氧化物(ee>99％)。
本发明公开了一种环氧化物水解酶及其制备方法。该环氧化物水解酶的主体氨基酸序列的第163位的氨基酸为苯丙氨酸，其主体氨基酸序列如SEQ IDNO：10所示，该环氧化物水解酶由主体核苷酸序列如SEQ ID NO：9所示的DNA分子所编码。该环氧化物水解酶的制备方法是用苯丙氨酸取代野生型环氧化物水解酶主体氨基酸序列第163位的酪氨酸，所述野生型环氧化物水解酶的主体氨基酸序列如SEQ ID NO：4所示，该野生型环氧化物水解酶由主体核苷酸序列如与野生型环氧化物水解酶相比，本发明环氧化物水解酶具有较高的温度稳定性并维持高酶活性，可用于水解顺式环氧琥珀酸或其盐为L(+)-酒石酸或其盐，提高工业化生产中生物催化剂的使用寿命。
本发明公开了一种催化效率提高的环氧化物水解酶突变体及其制备方法，环氧化物水解酶突变体是将如SEQ ID NO.2所示氨基酸序列的第104位、第179位和第232位的氨基酸序列进行单点突变获得。制备方法：将编码环氧化物水解酶的基因克隆到质粒pET‑28a(+)中，构建重组质粒pET‑28a(+)‑EHJ；利用定点突变技术获得环氧化物水解酶突变体；将含有编码正确突变体基因的重组质粒转化大肠杆菌感受态与野生型环氧化物水解酶相比，本发明环氧化物水解酶突变体能提高酶的热稳定性与酶活性，可以提高工业化生产中环氧化物水解酶的适用寿命。
本发明公开了一种环氧化物水解酶突变体、工程菌及其应用，所述环氧化物水解酶突变体是将SEQ ID NO.13所示氨基酸序列的第182位、第207位和/或第240位氨基酸进行单位点突变或多位点突变获得的；与野生型环氧化物水解酶相比，本发明提供的环氧化物水解酶突变体具有更高的催化活性和立体选择性，所述的环氧化物水解酶突变体尤其适合拆分外消旋环氧氯丙烷制备(S)‑环氧氯丙烷。
本发明公开一种环氧化物水解酶突变体及其制备方法，环氧化物水解酶突变体是将如SEQ ID NO.1所示氨基酸序列的第8位、第26位、第83位、第90位和第122位的氨基酸进行单点突变或多点突变获得。制备方法：将编码环氧化物水解酶的基因克隆到质粒pET28a(+)中，构建重组质粒pET28a(+)‑EH；采用滚环PCR扩增质粒pET28a(+)‑EH，得到含有编码环氧化物水解酶突变体的基因序列的开环重组载体与野生型环氧化物水解酶相比，本发明环氧化物水解酶具有极高的温度稳定性和pH值适应范围，可以大大提高工业化生产中环氧化物水解酶的使用寿命。
