本发明提供了用于鉴定日本血蜱的靶序列、引物、鉴定方法及试剂盒,属于蜱虫检测与鉴定技术领域。所述靶序列如SEQ ID NO.1所示,是首次扩增出的日本血蜱COI全长序列的一段。本发明提供了可特异性扩增日本血蜱COI部分序列的引物对,分别如SEQ ID No.2‑5所示,通过两次PCR反应可实现对日本血蜱快速、准确的鉴定。本发明克服了传统日本血蜱分类鉴定对标本完成性要求高、对鉴定者的专业分类水平要求高等诸多问题,提供的PCR引物及鉴定方法以及试剂盒操作方便,灵敏度高、特异性强、简单快速、成本低,能够满足日本血蜱快速、准确的物种分子鉴定需求