本发明公开了一种鸭坦布苏病毒E蛋白截短体基因、重组鸭瘟病毒及构建方法和应用。所述鸭坦布苏病毒E蛋白截短体基因,其核苷酸序列如SEQ ID No.4所示。一种重组鸭瘟病毒,所述重组鸭瘟病毒的基因组中插入有所述的鸭坦布苏病毒E蛋白截短体基因。本发明筛选获得了一种鸭坦布苏病毒E蛋白的截短体基因,通过将该E蛋白截短体基因插入到重组鸭瘟病毒的基因组中获得一种新的重组鸭瘟病毒,感染CEFs细胞后,该E蛋白截短体基因获得高效表达。该插入了E蛋白截短体基因的重组鸭瘟病毒能够用于鸭瘟病毒和鸭坦布苏病毒二联疫苗的制备。