本发明涉及基因工程技术领域,具体涉及一种启动子及其在上调目的基因的转录表达上的应用。本发明的启动子具有如SEQ ID NO:17所示的核苷酸序列。该启动子与已知的强启动子相比,具有更高的表达活性。可通过将其可操作地连接到目的基因的上游区域,实现对目的基因的转录表达上调,表达水平优于其天然启动子的作用,从而可提升相应功能。将该启动子应用于调控赖氨酸的代谢路径,具有明显的改善效果。
本发明公开了一组高强度的酿酒酵母人工小启动子。本发明提供了酿酒酵母人工启动子突变体库,是对酿酒酵母人工启动子UASF‑E‑C‑core1的核苷酸序列自3’末端起的第1‑6位中的全部或部分进行随机突变后得到的。本发明提供的酿酒酵母人工启动子突变体具体为如下中任一:核苷酸序列如SEQ ID No.10‑23所示的14个启动子突变体。本发明所提供一组高强度的酿酒酵母人工小启动子,其中强度最强的小启动子强度约是天然强启动子TDH3的3.3倍,是出发启动子强度的7倍。显著拓宽了人工小启动子的强度范围,为启动子工程更好的应用于酿酒酵母代谢途径的基因表达调控添砖加瓦。
本发明涉及一种包含启动子的分离的核酸序列,其是一种包含SEQ ID 1所示的pCS1的核酸序列或其有功能活性的变种的天然毕赤酵母序列,该变种是一种长度变种,一种突变体或SEQ ID 1的杂合序列,或其结合,涉及包含所述启动子的表达构建物和重组细胞,还涉及在所述启动子的控制下产生感兴趣的蛋白质的方法。本发明进一步涉及一种从真核细胞中识别组成型启动子的方法,和一种包含启动子的分离的核酸序列,该启动子在与编码POI的核苷酸序列可操作的连接时,指导其在宿主细胞中的表达水平高于在高和低生长速率的天然pGAP启动子控制下的表达水平。